[发明专利]基于HPLC-MS/MS检测平台的溶血磷脂酰胆碱的绝对定量分析方法

摘要

本发明公开了一种基于HPLC‑MS/MS检测平台的溶血磷脂酰胆碱的绝对定量分析方法。本发明建立了HPLC‑MS/MS检测平台，以利血平为内标物绘制LPC 14:0‑LPC 18:0系列物质检测的标准曲线，并对检测平台的线性、精密度和准确度进行验证，并检测血清的基质效应。验证结果表明本发明建立的HPLC‑MS/MS检测平台针对人血清中LPC物质的检测稳定性和准确性较高，满足临床需求，适于临床推广。

主权项

1.一种基于HPLC‑MS/MS检测平台的溶血磷脂酰胆碱的绝对定量分析方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）标本预处理：将人血清标本进行预处理去除干扰蛋白质；将人血清标本进行预处理除去干扰蛋白质的过程中加入了0.1% BHT的甲醇溶液进行前处理；（2）色谱分离：经过步骤（1）处理的标本注入到高效液相色谱柱中完成标本的初步分离；所述色谱柱是Durashell C18（L）色谱柱；流动相是0.1%甲酸25mM甲酸铵‑水溶液、0.1%甲酸‑甲醇溶液；流动相的参数如下：0min时，0.1%甲酸25mM甲酸铵‑水溶液的占比为70%，0.1%甲酸‑甲醇溶液的占比为30%；0.5min时，0.1%甲酸25mM甲酸铵‑水溶液的占比为50%，0.1%甲酸‑甲醇溶液的占比为50%：50%，1min时，0.1%甲酸25mM甲酸铵‑水溶液的占比为0%，0.1%甲酸‑甲醇溶液的占比为100%；4min时，0.1%甲酸25mM甲酸铵‑水溶液的占比为0%，0.1%甲酸‑甲醇溶液的占比为100%；4.1min时，0.1%甲酸25mM甲酸铵‑水溶液的占比为70%，0.1%甲酸‑甲醇溶液的占比为30%；5min时，停止；（3）质谱鉴定：初步分离后的标本进入质谱仪，完成定量分析离子碎片到的强度和质谱图的绘制，质谱仪的参数设置见下面的表格：表格中“*”表示定量离子对；“Q1”指母离子，“Q3”指子离子，单位均为质荷比m/z；“DP1”表示去簇电压，单位是伏特；“CE2”表示碰撞电压，单位是伏特；所述方法使用利血平作为溶血磷脂酰胆碱类物质定量检测的内标物。