[发明专利]基于FRET辨别DNA碱基长度及检测单链DNA结合蛋白的生物传感方法

摘要

本发明公开了基于荧光共振能量转移(FRET)辨别DNA碱基长度并检测单链DNA结合蛋白(SSB)的荧光传感方法，具体步骤如下：(1)阳离子共轭聚合物(CCP)与铱配合物混合，然后加入PBS缓冲溶液，得到用于检测SSB的基于CCP与铱配合物FRET效应的荧光传感器体系。检测荧光强度，计算CCP(415nm)的荧光强度与铱配合物(530nm)的荧光强度比值；(2)加入不同长度的DNA或发卡DNA到步骤(1)中的体系，检测荧光强度的变化；(3)不同浓度的SSB加入到步骤(2)中，然后加入缓冲溶液，检测荧光强度的变化，获得一系列不同浓度的SSB对应的荧光强度比值，建立荧光强度比值I₅₃₀/I₄₁₅与SSB浓度之间的定量关系；根据定量关系可以辨别DNA碱基长度并检测样品中SSB的未知浓度。

主权项

1.一种基于荧光共振能量转移FRET辨别DNA碱基长度并检测单链DNA结合蛋白SSB的荧光传感方法，具体步骤如下：(1)将85～95μL浓度为3～4mM阳离子共轭聚合物CCP与0.5～2μL浓度为0.5～2mM铱配合物混合，然后加入0.05～0.15M pH6.8～7.6的PBS缓冲溶液，得到用于检测SSB的基于CCP与铱配合物FRET效应的荧光传感器体系；检测荧光强度，计算CCP在415nm的荧光强度与铱配合物在530nm的荧光强度比值I₅₃₀/I₄₁₅；(2)a.加入1～3μL 5～15μM的单链DNA到步骤(1)中的体系，检测荧光强度的变化，计算CCP在415nm的荧光强度与铱配合物在530nm的荧光强度比值I₅₃₀/I₄₁₅；通过更换不同碱基数量的单链DNA，利用该方法辨别不同长度的DNA；b.加入1～3μL 5～15μM的发卡DNA到步骤(1)中的体系，检测荧光强度的变化，计算CCP在415nm的荧光强度与铱配合物在530nm的荧光强度比值I₅₃₀/I₄₁₅；其中，a部分的实验步骤用于不同碱基数量DNA的检测；b部分的实验步骤用于SSB的检测；(3)不同浓度的SSB加入到步骤(2)中，然后加入缓冲溶液，30～40℃下温育5～15min，检测荧光强度的变化，计算CCP在415nm的荧光强度与铱配合物在530nm的荧光强度比值I₅₃₀/I₄₁₅，即荧光共振能量转移效率，获得一系列不同浓度的SSB对应的荧光强度比值，建立荧光强度比值与SSB浓度之间的定量关系；根据这个定量关系可以检测样品中SSB的未知浓度。