[发明专利]一种日本医蛭唾液腺细胞的原代培养方法

摘要

本发明属于生物工程技术领域，公开了一种日本医蛭唾液腺细胞的原代培养方法，将剪碎后的组织块接种于25cm²的细胞封闭培养瓶中，加入5mL SFX‑INSCET昆虫细胞培养液，置于生化培养箱中29℃静止培养。本发明将大大提高天然水蛭素的产量；极少量的野生日本医蛭唾液腺细胞进行体外细胞培养后就能得到大量的唾液腺细胞，分离提取出大量天然水蛭素，有利于野生日本医蛭种群的保护，达到既深度开发利用又大力保护动物种质资源的目标。本发明快速、有效、重复性强，是对蛭类细胞培养的完善，为蛭类细胞原代培养的研究提供可靠的试验数据与基础。

主权项

1.一种日本医蛭唾液腺细胞的原代培养方法，其特征在于，所述日本医蛭唾液腺细胞的原代培养方法包括将剪碎后的组织块接种于25cm2的细胞封闭培养瓶中，加入5mL SFX‑INSCET昆虫细胞培养基，置于生化培养箱中29℃静止培养；所述接种之前需要：步骤一，用水去除日本医蛭身体表面的粘稠状分泌物，清除干净之后，先放于0.3％高锰酸钾溶液中浸泡，再放入酒精溶液中浸泡，对日本医蛭进行消毒处理；步骤二，在超净工作台内，将经过体表灭菌的日本医蛭转移到装有PBS缓冲液的一次性无菌培养皿中，PBS缓冲液浸没日本医蛭，用经过高温高压灭菌处理的手术剪刀和镊子取下日本医蛭的前端头部；步骤三，将头部转移到另一个装有PBS缓冲液的一次性无菌培养皿内，PBS缓冲液将其浸没，将日本医蛭的前端头部沿着口咽中部剪开，去除咽壁内表皮和外部皮肤，并用PBS漂洗；步骤四，将唾液腺置于酒精溶液中浸泡后，将所有唾液腺转移至第一个装有含抗生素的PBS缓冲液的器皿中，浸泡5min；然后转移至第二个装有含抗生素的PBS缓冲液的器皿中，浸泡5min；最后转移至第三个装有含抗生素的PBS缓冲液的器皿中浸泡5min，同时剪碎组织块；其中，含抗生素的PBS缓冲液指加入了终浓度各为800U/mL的青霉素、链霉素、两性霉素的PBS缓冲液。