[发明专利]一种消除组培苗黄化的核桃组培快繁方法

摘要

本发明公开了一种消除组培苗黄化的核桃组培快繁方法，包括繁殖材料选择、外植体处理、初始芽诱导和增殖培养工序；采集当年生长健壮且无病虫害的核桃嫩枝梢作为繁殖材料，对枝条进行修剪成茎段作为外植体，对外植体灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中诱导初始芽发生，再将初始芽接种于增殖培养基中后得到无黄化现象的组培继代芽。本发明在获得无菌苗的的基础上探索核桃组培快繁育苗过程中继代培养时出现失绿黄化，严重影响了核桃组培苗的正常分化和生长，从而导致增殖系数降低的问题提出解决方法，消除核桃组培苗黄化现象，能正常分化和生长，提高繁殖系数，稳定遗传性状，从而使核桃组培苗能达到工厂化育苗的标准。

主权项

1.一种消除组培苗黄化的核桃组培快繁方法，其特征在于：包括繁殖材料选择、外植体处理、初始芽诱导和增殖培养工序；采集当年生长健壮且无病虫害的核桃嫩枝梢作为繁殖材料，对枝条进行修剪成茎段作为外植体，对外植体灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中诱导初始芽发生，再将初始芽接种于增殖培养基中后得到无黄化现象的组培继代芽；主要操作步骤如下：(1)繁殖材料选择：选择通过国家级或省级良种审定的核桃良种无性系、树龄5～8年生的为采穗母树；在采穗母树树冠外围的上方采集当年生长健壮且无病虫害的核桃嫩枝梢，作为核桃组培的优良繁殖材料；(2)外植体处理：将采集到的核桃嫩枝梢剪成只保留顶芽或2～3cm长带腋芽的茎段作为外植体，用体积浓度75％乙醇溶液对外植体浸泡灭菌30s，蒸馏水冲洗2次后将外植体置于超净台，再用体积浓度0.1％HgCl2溶液以振荡的方式对外植体进行灭菌处理8～10min，最后用无菌水冲洗5次；(3)初始芽诱导：将步骤(2)处理得到的外植体接种于诱导培养基中，并置于温度25±2℃，光照强度2000～3500LX，光照10～14h/d的环境中诱导初始芽发生；(4)增殖培养：将步骤(3)获得的初始芽接种于增殖培养基,并置于温度25±2℃，光照强度2000～3500LX，光照10～14h/d的环境中进行增殖培养，得到无黄化现象的组培继代芽；步骤(3)所述的诱导培养基的原料组分和质量含量为：改良MS+6‑BA 0.5mg·L‑1+蔗糖30000mg·L‑1+水解乳蛋白300mg·L‑1+表油菜素内酯0.2mg·L‑1+琼脂3000mg·L‑1；步骤(4)所述的增殖培养基的原料组分和质量含量为：改良MS+6‑BA 1.0～2.0mg·L‑1+蔗糖30000mg·L‑1+水解乳蛋白300～500mg·L‑1+表油菜素内酯0.3～0.5mg·L‑1+琼脂3000mg·L‑1；步骤(3)和(4)所述的改良MS培养基的组成为：KNO3 1600mg·L‑1；NH4NO3 1200mg·L‑1；CaCl2 350mg·L‑1；MgSO4.7H2O 370mg·L‑1；Ca(NO3)2.4H2O 100mg·L‑1；KH2PO3 270mg·L‑1；MnSO4.4H2O 22.3mg·L‑1；ZnSO4.7H2O 10.6mg·L‑1；CuSO4.5H2O 0.025mg·L‑1；H3BO3 8.2mg·L‑1；Na2MoO4.2H2O 0.25mg·L‑1；KI 0.83mg·L‑1；CoCl2.6H2O 0.025mg·L‑1；Na2·EDTA 37.3mg·L‑1；FeSO4.7H2O 27.8mg·L‑1；维生素B1 0.4mg·L‑1；维生素B6 0.5mg·L‑1；烟酸2.0mg·L‑1；甘氨酸1.0mg·L‑1；肌醇120mg·L‑1。