[发明专利]从胎盘中富集血小板和提取活性因子的方法

摘要

本发明涉及从胎盘中富集血小板和提取活性因子的方法。具体地说，从胎盘中富集血小板和提取活性因子的方法，其包括以下步骤：(1)血小板富集；(2)血小板裂解物制备，根据血小板浓度将步骤(1)富集的血小板样本稀释；化学裂解：按照沉淀体积：激活剂＝1：5‑10进行血小板激活；室温静止，进行离心，分别收集上清液和沉淀，上清液至4摄氏度冰箱保存；物理裂解：将上一步骤收集的沉淀进行37摄氏度/‑80摄氏度反复冻融三次裂解，得裂解物；将上面步骤收集的上清液和裂解后产物充分混匀得裂解物；(3)血小板源性活性因子冻干与保存。还涉及一种冻干粉。本发明方法具有如本发明说明书所述有益效果。

主权项

从胎盘中富集血小板和提取活性因子的方法，其包括以下步骤：(1)血小板富集11)将胎盘放入无菌托盘中，弃除血污块；12)用无菌的剪刀将胎盘剪碎，并用0.9％氯化钠生理盐水进行组织表面和内部冲洗，挤压收集胎盘血后，弃除组织；13)将上一步骤收集的胎盘血经无菌的300目滤网过滤，混匀后取样进行血常规检测；14)将上一步骤经过滤的胎盘血收集至250ml离心瓶中，500‑2000g，10‑15min离心，收集上清；15)将上一步骤收集的上清转移至新的50ml离心管中，2400‑5000g，10‑20min离心后，收集沉淀，弃上清；16)将上一步骤收集的沉淀进行重悬，得到血小板样本，取样进行血常规检测(主要用于富集后血小板含量检测，一般富集后血小板浓度是富集前的15‑80倍，即富集系数为15‑80倍，示例性的结果见表1)；(2)血小板裂解物制备21)根据血小板浓度将步骤(1)富集的血小板样本稀释2‑20倍；22)化学裂解：按照沉淀体积：激活剂(例如，其中含有氯化钙、葡萄糖酸钙或凝血酶)＝1：5‑10进行血小板激活；23)室温静止0.5‑1小时后(例如间隔20min进行混合一次)，进行3000‑5000g离心，5‑10min，分别收集上清液和沉淀，上清液至4摄氏度冰箱保存；24)物理裂解：将上一步骤收集的沉淀进行37摄氏度/‑80摄氏度反复冻融三次裂解，间隔10min‑15min/次，得裂解物；25)将上面步骤收集的上清液和裂解后产物充分混匀得裂解物；(3)血小板源性活性因子冻干与保存以‑80摄氏度冰箱直接冻存，或者制成冻干粉；制成冻干粉时在裂解物溶液中添加重量/体积百分数为0.5％‑6％的冻干保护剂，或者不添加冻干保护剂(示例性的，冻干保护剂选自海藻糖、甘露醇、壳聚糖或其组合)，分装至1‑2.5ml/支，冷冻干燥成干粉剂。