[发明专利]一种新型CpGISS疫苗佐剂的制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种新型CpGISS疫苗佐剂的制备方法与应用，采用发酵法大量生产CpG ISS，并采用金纳米粒子作为载体吸附，得到新型CpGISS疫苗佐剂。有益效果为采用本发明的发酵培养基发酵培养，巴斯德毕赤酵母的增殖速度快，含未甲基化的CpG ISS解旋、复制速度快，CpG ISS的产量高；采用发酵的方式大量生产CpG ISS，成本低廉且安全性高；CpG ISS‑金纳米粒子复合物极易于进入细胞，而且不影响CpG ISS的生物学功能；使用本发明疫苗佐剂，能缩短免疫期时间，免疫效果好，在动物养殖生产或人体中应用，提高成活率和免疫保护率。

主权项

一种新型CpGISS疫苗佐剂的制备方法，其特征在于以下步骤：1）对处于保藏状态的巴斯德毕赤酵母进行活化培养、一级种摇瓶培养和二级种摇瓶培养处理后，将菌种接种到消毒灭菌过的发酵罐中，调节转速和空气流量，发酵过程中流加氨水，并且分批补充培养基；2）发酵结束后，将发酵液离心，并收集菌体，用蒸馏水清洗后，在酵母泥中加入蒸馏水，水浴处理，处理完后冷却，并进行超声破碎处理，过滤，收集滤液；3）将含金纳米粒子的溶液高速离心，弃去上清液，沉淀重悬，加入步骤2得到的滤液，轻轻吹打混合均匀，恒温振荡，然后加入PBS溶液，混合均匀，恒温振荡，离心，弃上清液，洗涤，加入PBS溶液，得到新型CpGISS疫苗佐剂；所述的发酵培养基成份及其重量份为：蔗糖50~60份、酵母粉60~80份、蛋白胨10~15份、尿素30~45份、麦芽汁6~9份、KH2PO4 8~12份、K2HPO4·3H2O 5~7份、MgSO4·7H2O 0.2~0.3份、ZnSO4·7H2O 5~7.8份、MnSO4·4H2O 24~35份、生物素0.016~0.02份、核黄素磷酸钠0.003~0.005份、二十碳五烯酸乙酯0.02~0.06份和去离子水1700~2000份。