[发明专利]一种木薯脆性胚性愈伤组织的培养方法

摘要

本发明公开了一种木薯脆性胚性愈伤组织的培养方法，包括以下步骤：(一)脆性胚性愈伤组织诱导；(二)脆性胚性愈伤组织再生。该木薯脆性胚性愈伤组织的培养方法具有脆性胚性愈伤组织诱导产生时间短，产生率高的优点，且木薯优选为华南8号和华南6号等常规栽培品种。

主权项

1.一种木薯脆性胚性愈伤组织的培养方法，其特征是包括以下步骤：（一） 脆性胚性愈伤组织诱导（1.1）选取木薯体胚块，经预处理后，置于脆性胚性愈伤组织诱导培养基上黑暗培养，诱导产生初生脆性胚性愈伤组织；（1.2）将初生脆性胚性愈伤组织转接到新鲜的脆性胚性愈伤组织诱导培养基上增殖扩大培养，获得脆性胚性愈伤组织；（二）脆性胚性愈伤组织再生（2.1）将脆性胚性愈伤组织收集到液体体胚诱导培养基中，震荡培养后，去除多余的松软非胚性组织，然后倒掉液体体胚诱导培养基，再将脆性胚性愈伤组织置于体胚诱导培养基中继续诱导培养产生体胚；（2.2）将体胚转接到新鲜体胚诱导培养基上，黑暗条件下对体胚进行扩繁培养，获得扩繁培养后体胚；（2.3）将扩繁培养后体胚转接到体胚成熟培养基上培养，促进体胚成熟为绿色子叶型胚；（2.4）将绿色子叶型胚转接到体胚萌发培养基中培养，促进绿色子叶型胚萌发，进而再生成苗，获得木薯植株；步骤（1.1）中所述木薯体胚块来源于华南6号木薯或华南8号木薯；步骤（1.1）中所述预处理包括将木薯体胚块置于含有甘露醇的容器中，用透气封口膜封口，然后将容器置于真空泵中，调节气压下降至0.08 Mpa时开始计时，15 ~20 min后取出，在灭菌过的工作台中，将上述处理过的木薯体胚块取出，用灭菌滤纸吸干水分后，放置在脆性胚性愈伤组织诱导培养基上黑暗培养20~30天，诱导产生初生脆性胚性愈伤组织，其中甘露醇的浓度为250~300 mmol/L；步骤（1.1）~（1.2）中脆性胚性愈伤组织诱导培养基成分为：GD、2,4‑D、蔗糖和琼脂粉，其中1L GD中加入2,4‑D 8~12 mg、蔗糖15~20 g、琼脂粉10~15 g；步骤（2.1）中体胚诱导培养基成分为：NMS培养基、2,4‑D、蔗糖和琼脂粉，其中1L NMS培养基中加入有2,4‑D 8~10 mg、蔗糖20~30g、琼脂粉 7.5 ~8.5 g；其中NMS培养基是将MS培养基中CaCl₂用量扩大为原来的5倍，其它MS培养基成分不变获得的；步骤（2.3）中体胚成熟培养基成分为：MS、蔗糖和琼脂粉，其中1L MS中加入有蔗糖20~30 g、琼脂粉7.5~8.5 g；步骤（2.4）中体胚萌发培养基成分为：MS、6‑BA、蔗糖和琼脂粉，其中1L MS中加入6‑BA 0.7~0.9 mg、蔗糖20~30 g、琼脂粉7.5 ~8.5 g。