[发明专利]一种构建二球悬铃木子叶高频再生体系的方法及其应用有效
| 申请号： | 201710109602.4 | 申请日： | 2017-02-27 |
| 公开（公告）号： | CN106857259B | 公开（公告）日： | 2020-01-10 |
| 发明（设计）人： | 包满珠;暴志茹;张佳琪;刘国锋;张艳萍;邵长生;王小林 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/00 | 分类号： | C12N5/00;A01H4/00 |
| 代理公司： | 42001 武汉宇晨专利事务所 | 代理人： | 张红兵 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种构建二球悬铃木子叶高频再生体系的方法及其应用。本发明以二球悬铃木种子萌发的子叶为外植体，通过器官直接再生途径建立二球悬铃木子叶不定芽的高频再生体系。该体系包括五个培养阶段：种子消毒；种子萌发；子叶不定芽再生诱导培养；不定芽芽增殖培养与生根培养。通过综合比较不同激素种类及浓度组合对子叶不定芽的诱导率、平均芽数、生长状态的影响，优选得到二球悬铃木子叶不定芽高效再生系列培养基。本发明的方法及其专用培养基可获得稳定的高频的二球悬铃木再生体系。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 构建 悬铃木 子叶 高频 再生 体系 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种构建二球悬铃木子叶高频再生体系的方法，其特征在于包括以下步骤：/n(1)球果采集/n在悬铃木球果成熟期的10-12月份，从成年的二球悬铃木树上采集饱满的当年生球果；/n(2)种子消毒/n取球果剥离出种子，先用清水揉搓脱去种毛；将搓洗干净的种子放于超净工作台上按以下程序进行消毒处理：先用75％的酒精消毒40s，再用0.1％的升汞溶液消毒40min，期间晃动种子2-3次，最后用无菌水冲洗3次；/n(3)子叶不定芽的再生诱导/n将消毒后的种子，放于无菌的培养皿中，培养皿内铺无菌的湿润滤纸，在光下萌发培养1周，待子叶展开后，取靠近芽点的中下部1/2子叶接种于子叶不定芽再生诱导培养基中，于光下培养45d至切口处诱导出不定芽，期间每2周更换一次新鲜的子叶不定芽再生诱导培养基；培养温度为25℃±2℃，光照强度为2400lx，光周期为16h光照/8h黑暗；/n(4)子叶不定芽的增殖和生根培养/n待步骤(3)中子叶再生出的不定芽长至2-3cm时切下，转移至子叶不定芽增殖培养基中于光下培养40-45d，取顶端3-4cm的顶芽转入到子叶不定芽生根培养基中进行生根培养；培养温度为25℃±2℃，光照强度为2400lx，光周期为16h光照/8h黑暗；/n其中：/n培养基成分及其配比如下：/n子叶不定芽再生诱导培养基：MS，附加6-BA4.0mg/L，NAA0.2mg/L，蔗糖3.0％，琼脂0.75％，补足蒸馏水至1L，调培养基的pH至5.8-6.0；/n子叶不定芽增殖培养基：MS，附加6-BA0.3mg/L，NAA0.05mg/L，蔗糖3.0％，琼脂0.75％，补足蒸馏水至1L，调培养基的pH至5.8-6.0；/n子叶不定芽生根培养基：1/2MS，附加IBA0.1mg/L，蔗糖3.0％，琼脂0.75％，补足蒸馏水至1L，调培养基的pH至5.8-6.0。/n
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