[发明专利]一种基于单分子的检测过氧化氢的方法

摘要

本发明涉及一种基于单分子的检测过氧化氢的方法，包括核酶结构的生成、核酶在玻片上固定和利用单分子荧光显微镜追踪监测过程。该方法通过将G‑四联体与血晶素的复合物固定在修饰界面上，利用复合物催化无荧光底物生成荧光产物的反应，结合单分子荧光显微镜，实时监测检测过程。本发明的优点在于利用单分子荧光显微术高灵敏、高时间分辨率的特点，可以对检测过程实时观测成像，信噪比高。可得到单个检测单元催化生成单个荧光产物的信息。

主权项

一种基于单分子的检测过氧化氢的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）核酶结构的生成将一定比例的G‑四联体DNA与Cy 5、生物素双修饰的固定链混合均匀，于95℃孵育10 min，缓慢降温，使G‑四联体与固定链杂交并形成四联体结构，得到复合物Ⅰ；（2）核酶在玻片上固定稀释复合物Ⅰ至一定浓度后，与血晶素（hemin）以一定比例于25℃孵育一段时间，得到复合物Ⅱ；将复合物Ⅱ与链霉亲和素修饰的玻片孵育一定时间后，缓冲液冲洗干净过量复合物；（3）利用单分子荧光显微镜追踪监测过程在玻片上滴加100微升反应液，反应液包括一定浓度的过氧化氢及Amplex Red；采用单分子荧光显微镜实时观测复合物Ⅱ催化无荧光Amplex Red 生成荧光产物试卤灵（resorufin）的过程。