[发明专利]革兰氏阳性及阴性菌质谱检测试剂盒及快速鉴定的方法

摘要

本发明涉及革兰氏阳性及阴性菌的生物质谱检测试剂盒及制备方法，属于微生物快速检测技术领域。由标准菌株、标准蛋白混合物、前处理液、革兰氏阳性菌预混液、革兰氏阴性菌预混液、CHCA基质、稳定剂等组成，可以实现革兰氏阳性和阴性菌分类快速检测。标准菌株、标准蛋白混合物、稳定剂、预混液及基质等各小管放置于4℃冷藏。本发明可适用于不同革兰氏菌的纯菌落质谱检测用试剂盒。

主权项

1.一种革兰氏阳性和阴性菌分类处理的质谱样品制备试剂盒，该试剂盒包括以下物质：(1)前处理液：取纯甲酸、乙酸和水，5‑10℃环境下混合，控制甲酸浓度20‑30％(v/v)而乙酸0‑10％(v/v)，随后加入0.2‑0.5mM的硫脲；(2)革兰氏阳性菌预混液：将乙醇、乙腈和水常温混合，三者配比为1：1：1，制备成为革兰氏阳性菌预混液；(3)革兰氏阴性菌预混液：先将乙醇、乙腈、水常温混合，三者配比为1：1.5：1，加入0.5mM的硫脲，制备成为革兰氏阴性菌预混液；(4)阳性基质、阴性基质；(5)菌落缓冲液：0.1M的PBS或NaAC，pH值6.5～7.2；(6)标准菌株：ATCC8739大肠埃希菌株干粉，由BSA溶液与纯菌落混合后经过冷冻干燥而得；(7)标准蛋白混合物：由ATCC25923金黄色葡萄球菌，经过由5M尿素，2M硫脲，1.0％3‑[3‑(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐(CHAPs)及0.5M Tris‑HCl组成的裂解液处理1分钟后，13000rpm离心15分钟，去除沉淀后获得的蛋白混合物；(8)稳定剂：2～5％的三氟乙酸母液；(9)革兰氏染色液：包括结晶紫溶液、碘酒、番红溶液、95％乙醇和水。