[发明专利]一种用于OTA灵敏检测的可抛式适配体传感器的制备方法

摘要

本发明提供了一种用于OTA灵敏检测的可抛式适配体传感器的制备方法，步骤如下步骤1、MPA修饰的纳米胶体金溶液的制备；步骤2、适配体的活化；步骤3、PDDA修饰的丝网印刷电极的制备；步骤4、金纳米粒子修饰的丝网印刷电极的制备；步骤5、适配体修饰的Au NPs‑SPCE的制备。与传统检测方法相比，本发明中所提出的OTA的免标记阻抗检测方法具有操作更简便灵活，仪器设备更简单，试剂用量少，检测成本低廉等特点。

主权项

一种用于OTA灵敏检测的可抛式适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：步骤1、MPA修饰的纳米胶体金溶液的制备：取质量浓度为0.01％的HAuCl4溶液100mL，加热至沸腾，搅拌条件下迅速加入质量浓度为1％的柠檬酸三钠溶液3mL，并继续煮沸15分钟；结束反应后将溶液冷却至室温，得到胶体金；在振荡的条件下，向10mL胶体金中逐滴加入60μL MPA，滴加完毕后持续振荡5小时；反应结束后离心得到紫黑色沉淀，水洗3次后向紫黑色沉淀物中加入5mL 50mM pH＝7.4的Tris‑HCl缓冲液，沉淀物立刻均匀分散为紫红色胶体溶液，即为MPA修饰的纳米胶体金溶液；步骤2、适配体的活化：首先，将20μL 100μM的OTA适配体标准液加入到5μL 50mM pH＝7.4的Tris‑HCl缓冲溶液中，该Tris‑HCl缓冲溶液中含有100mM的磷酸三氯乙酯(TCEP)；然后在室温条件下，放置在往复震荡仪上振荡1小时；最后，利用离心超滤装置移去多余的磷酸三氯乙酯，4℃密封保存备用；步骤3、PDDA修饰的丝网印刷电极的制备：首先，将清洗过的丝网印刷电极浸入5mL含有0.5M H2SO4和0.1M KCl的混合溶液中进行循环伏安扫描，直至扫描得到稳定的循环伏安图，二次水淋洗，氮气吹干，得到处理过的丝网印刷电极；然后将10μL体积浓度为1％的PDDA溶液滴涂在处理过的丝网印刷电极表面，室温下反应2小时，二次水淋洗，氮气吹干，密封保存备用；步骤4、金纳米粒子修饰的丝网印刷电极的制备：将10μL步骤1制备的MPA修饰的金纳米粒子溶液滴涂在步骤3制备的丝网印刷电极表面，室温下反应2小时，得到金纳米粒子修饰的丝网印刷电极，记为Au NPs‑SPCE，4℃密封保存备用；步骤5、适配体修饰的Au NPs‑SPCE的制备：首先取10μL 100μM的OTA适配体标准液滴涂在步骤4中制备的工作电极表面，室温条件下反应12小时，用50mM pH＝7.4的Tris‑HCl缓冲溶液淋洗，氮气吹干；然后将电极浸没在5mL 1mM 6‑巯基己醇(MCH)中，室温条件下反应1小时，封闭电极后分别用Tris‑HCl缓冲液淋洗，氮气吹干，得到适配体修饰的Au NPs‑SPCE，即所述适配体传感器，4℃密封保存备用。