[发明专利]一种用于microRNAs检测的电化学方法

摘要

一种用于microRNAs检测的电化学方法，包括以下步骤：A：纳米银溶液的制备：B：工作电极的制备，包括子步骤：B1：在玻碳电极表面电沉积金纳米粒子；B2：在B1所制得的电极表面组装巯基化的DNA捕获探针：5'‑TGACTTCAACATCAGTCTGATAAGCTAAGTCAT‑(CH2)6‑SH‑3'；B3：采用6‑巯基己醇封闭B2所制得的电极未反应的金表面；B4：将microRNAs修饰到骤B3得到的电极表面；B5：将4‑巯基苯硼酸和A得到的纳米银溶液混合物修饰到步骤B4得到的电极表面；C：电化学测试：将B制备得到的电极作为进行工作电极进行电化学测试；本方法操作简单，成本低，灵敏度高、测试准确。

主权项

1.一种用于microRNAs检测的电化学方法，包括以下步骤：A： 纳米银溶液的制备：采用前驱体为硝酸银，还原剂为硼氢化钠，稳定剂为柠檬酸钠，将硝酸银溶液加入到柠檬酸钠溶液中，剧烈搅拌1分钟后，加入硼氢化钠溶解，继续在室温条件下搅拌2小时，即得到柠檬酸稳定的纳米银溶液，低温储存2天后备用；B：工作电极的制备，包括以下子步骤：B1：在玻碳电极表面电沉积金纳米粒子；B2：在步骤B1所制得的电极表面组装巯基化的DNA捕获探针：5'‑TGACTTCAACATCAGTCTGATAAGCTAAGTCAT‑(CH2)6‑SH‑3'； DNA捕获探针的浓度为50 µM，采用100 mM氯化钠的Tris缓冲溶液配制，Tris的浓度为20 mM，pH值为7.4；B3：采用6‑巯基己醇封闭步骤B2所制得的电极未反应的金表面；B4：将microRNAs修饰到步骤B3得到的电极表面；microRNAs采用100 mM氯化钠的Tris缓冲溶液配制，Tris缓冲溶液浓度为20 mM，pH值为7.4，所述的Tris缓冲溶采用焦碳酸二乙酯处理过的二次蒸馏水配制；B5：将4‑巯基苯硼酸和步骤A得到的纳米银溶液混合物修饰到步骤B4得到的电极表面，形成纳米银网络结构；将步骤B4制得的电极浸泡在浓度为3.5 µM的4‑巯基苯硼酸溶液中，然后加入浓度为1 nM的纳米银溶液，反应30分钟后用蒸馏水冲洗电极，除去未结合的纳米银粒子；所述的4‑巯基苯硼酸溶液用PBS溶液配制，PBS溶液的浓度为5 mM，pH值为7.4；C：电化学测试：将步骤B制备得到的电极作为工作电极进行电化学测试。