[发明专利]卵巢癌易感基因变异文库构建方法有效
| 申请号： | 201611187866.3 | 申请日： | 2016-12-20 |
| 公开（公告）号： | CN106498082B | 公开（公告）日： | 2019-12-20 |
| 发明（设计）人： | 王明;赵会 | 申请（专利权）人： | 菁良基因科技(深圳)有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06 |
| 代理公司： | 44205 广州嘉权专利商标事务所有限公司 | 代理人： | 唐致明 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市盐田区海山街道田*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种卵巢癌易感基因变异文库构建方法，包括以下步骤：A.根据卵巢癌相关基因的变异区域，设计能够检测这些变异区域的引物对；B.计算得到各引物对的判断参数R，将判断参数R的值小于或等于1的引物对，归为第一组引物组合液，将判断参数R的值大于1的引物对，归为第二组引物组合液；C.将待测样品DNA抽提纯化；D.分别采用第一组引物组合液和第二组引物组合液对纯化后的样品进行初始PCR扩增；E.对所述目标片段进行接头连接得到带接头片段；F.采用第一组引物组合液和第二组引物组合液的混合液进行文库PCR扩增，得到测序文库。本发明的卵巢癌易感基因变异文库构建方法所构建的文库测序通量高，灵敏度强，特异性强，能够用于检测游离DNA低频突变的。 | ||
| 搜索关键词： | 卵巢癌 基因 变异 文库 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种卵巢癌易感基因变异文库构建方法，其特征在于，包括以下步骤：/nA.根据卵巢癌相关基因的变异区域，设计能够检测这些变异区域的引物对，所述引物对的5’端均引入脱氧次黄嘌呤核苷酸碱基；/nB.通过引物设计软件得到各引物对的参数W1、Tm1、W2和Tm2，从而计算得到各引物对的判断参数R，计算公式如下：/nR=0.1×[W1+Tm1/(Tm1+Tm2)]+0.9×[W2+Tm2/(Tm1+Tm2)]；/n其中，W1是扩增产物的GC含量，Tm1是扩增产物的退火温度，W2是上游引物GC含量和下游引物GC含量的平均值，Tm2是上游引物退火温度和下游引物退火温度的平均值，/n将判断参数R的值小于或等于1的引物对，归为第一组引物组合液，将判断参数R的值大于1的引物对，归为第二组引物组合液；/nC.将待测样品DNA抽提纯化；/nD.分别采用第一组引物组合液和第二组引物组合液对纯化后的样品进行初始PCR扩增得到目标片段，然后清除引物，采用第一组引物组合液进行初始PCR扩增时的退火温度低于采用第二组引物组合液进行初始PCR扩增时的退火温度；/nE.对所述目标片段进行接头连接得到带接头片段，然后进行纯化；/nF.采用第一组引物组合液和第二组引物组合液的混合液对纯化后的带接头片段进行文库PCR扩增，然后进行纯化，得到测序文库。/n
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于菁良基因科技(深圳)有限公司，未经菁良基因科技(深圳)有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201611187866.3/，转载请声明来源钻瓜专利网。
