[发明专利]一种同时分离和测定唾液中多种酚类物质的方法

摘要

本发明涉及一种分离和测定唾液中多种酚类物质的方法，属于分析化学技术领域，本发明采用唾液收集管收集唾液样品，采集完后经高速离心后取上清液，然后依次经酸化、加入内标，后涡旋振荡至混匀，接着过微孔滤膜，滤液采用超高效液相色谱‑多波长荧光法分离和测定唾液中多种酚类物质，制作标准曲线，内标法定量。本发明方法可以有效的用于分离和测定唾液中多种酚类物质，方法分离效果好，检出限低，精密度好，准确可靠，具有推广应用价值。

主权项

1.一种同时分离和测定唾液中多种酚类物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤（1），样品采集：将唾液收集管中的棉棒放于口中，咀嚼后放回收集管，经离心后，得到唾液样品；所述的咀嚼时间为1‑3 min；步骤（2），样品酸化：移取唾液样品于样品管中，依次加入酸化剂、内标物，然后经涡旋振荡至混合均匀，得到酸化液；所述的酸化剂为乙酸，所述的酸化剂用量为唾液体积的0.5%‑2%；所述的内标物为4‑氟苯酚，浓度为0.1‑10mg/L；步骤（3），测定：将步骤（2）得到的酸化液，过0.22 μm微孔滤膜，采用超高效液相色谱‑多波长荧光法分离和测定唾液中的多种酚类物质，内标法定量，根据标准曲线计算各酚类物质的含量；所述的多种酚类物质包括对苯二酚、间苯二酚、邻甲基对苯二酚、邻苯二酚、苯酚、4‑甲基苯酚、2‑甲基苯酚、2‑甲氧基‑4‑甲基‑苯酚、2,6‑二甲基苯酚、2‑乙基苯酚和丁香酚；所述超高效色谱条件如下：色谱柱：C18反相色谱柱，C18反相色谱柱的规格为长度×内径是100 mm× 2.1 mm，粒径为1.7 μm；流速为0.1‑0.4 mL/min；柱温为30‑60℃；进样量为1‑3 μL；流动相A为体积浓度为0.5‑2%的乙酸水溶液，流动相B为乙酸、乙腈和水的混合溶液，流动相B乙酸浓度与流动相A中乙酸浓度相同，乙腈体积浓度为25‑50%，梯度洗脱；梯度洗脱条件为：第0min，流动相A 70‑95%，流动相B 30‑5%；第6‑12min任意一时刻改变流动相浓度配比，改变后的流动相A为 0%，流动相B 为100%；第15min停止洗脱；所述多波长荧光法的荧光检测器的波长选择见下表：。