[发明专利]检测阿维菌素类药物的方法

摘要

本发明提出了检测阿维菌素类药物的方法，包括：(1)将样品、正己烷、水及乙腈进行混合，并将所得到的混合液进行离心，得到具有上、下两层第一分离液的混合液，收集下层第一分离液；(2)将水、乙腈和上层第一分离液进行混合，并将所得到的混合液进行离心，得到具有上、下两层第二分离液的混合液，收集下层第二分离液；(3)合并下层第一分离液和下层第二分离液，加入水和三乙胺，得到待测液；(3)用色谱柱净化待测液，得到净化产物；(4)将净化产物进行衍生化，得到衍生化产物；(5)利用液相色谱法对衍生化产物进行检测，并基于检测结果确定样品中阿维菌素类药物含量。本发明的方法能够准确地检测阿维菌素类药物。

主权项

1.一种检测阿维菌素类药物的方法，其特征在于，包括：1)称取黄油或奶油5.0g于50mL离心管中，加入10mL正己烷、5.0mL 50℃热水和10ml乙腈，涡动振荡1min，8000r/min离心10min，得到具有上、下两层第一分离液的混合液，收集下层第一分离液；2)将所述上层第一分离液中加入5.0mL水和乙腈10mL，涡动振荡1min，8000r/min离心10min，得到具有上、下两层第二分离液的混合液，收集下层第二分离液并与所述下层第一分离液混合，向所得到的混合液中加入10mL水和50μL三乙胺，混匀，得到待测液；3)依次用乙腈5mL和洗涤液5mL活化C18固相萃取柱，取所述待测液过柱，自然流干，抽干5min；加异辛烷3mL洗涤所述C18固相萃取柱，抽干5min，乙腈5mL洗脱，收集洗脱液于10mL试管中，于60℃水浴氮气吹干，然后向所述试管中加入1mL乙腈，涡旋振荡1min，于60℃水浴氮气吹干，得到净化产物；4)分别独立地将埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素标准品进行梯度稀释，得到各自不同浓度标准工作液；各取所述不同浓度的标准工作液1mL于不同的5mL试管中，于60℃氮气吹干，得到不同浓度的埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素产物；5)分别向含有净化产物、不同浓度的埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素产物的试管依次加入100μL衍生化试剂A液和150μL衍生化试剂B液，密闭，涡动10s，依次加入冰醋酸50μL和三乙胺50μL，涡动10s，于室温密闭反应30min，加入甲醇650μL混匀，过滤，分别得到各自的衍生化产物；6)将所述各自的衍生化产物进行液相色谱检测，将所得到的不同浓度的埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素衍生化产物的峰面积及其对应浓度绘制标准曲线；7)将所述净化产物的衍生化产物对应的峰面积代入所述标准曲线，计算得到所述黄油或奶油中埃普利诺菌素、阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素含量，所述液相色谱检测条件如下：色谱柱：Symmetry C18色谱柱(250×4.6mm，粒径5μm)；流动相：乙腈‑水溶液，其中乙腈浓度为90体积％；柱温箱：30℃；激发波长：365nm；发射波长：475nm；进样量：20μL；流速：1.0mL/min。