[发明专利]一种冷酚法淋病奈瑟菌多糖疫苗的制备方法

摘要

本发明涉及一种冷酚法淋病奈瑟菌多糖疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤将羊毛脂和液体石蜡加温水浴，置研钵中，然后将卡介苗加入研钵，边加边研磨，研磨均匀在8磅高压20min备用；本发明所述方法制备的冷酚法淋病奈瑟菌多糖疫苗，使用低剂量的多糖抗原可达到与高剂量抗原相同的免疫效果。本发明所述方法步骤简单，可工业化生产，经济效益好。

主权项

一种冷酚法淋病奈瑟菌多糖疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）将羊毛脂和液体石蜡加温水浴，置研钵中，然后将卡介苗加入研钵，边加边研磨，研磨均匀在8磅高压20min备用；（2）淋球菌接种于巧克力培养基，在37℃环境烛缸培养48h；（3）收获淋病奈瑟菌后以0.5％甲醛灭菌，4000r/min，离心15min，收集上清液，于上清液中滴入数滴十六烷基三甲基溴化铵；（4）室温下过夜，13000r/min，离心3，收集沉淀物；（5）沉淀物溶于2mol/L氯化钙溶液，至终浓度为1mol/L，摇动1h，充分解离多糖十六烷基三甲基溴化铵；（6）加入75％乙醇至终浓度为25％，过夜，16000r/min，离心15min去沉淀，收集上清液；（7）于上清液中加入冷却乙醇至终浓度为80％，充分振摇；沉淀多糖，16000r/min，离心30min，收集沉淀多糖，然后用无水乙醇及丙酮各洗涤2次，第1次13000r/min，离心5min；（8）第2次16000r/min，离心30min；将沉淀物，即多糖粗制品保存在－20℃以下备用；（9）将粗制品溶解于1/10饱和中性醋酸钠溶液中，使其浓度达10～20mg/ml，然后将1倍体积多糖上清液加入2倍体积冷酚充分振摇，重复提取3次；（10）然后16000r/min，离心10min，收最上层澄清液体，重复3次并用0．1mol/l氯化钙溶液透析；（11）透析后离心，于上清液中加乙醇至最终浓度为75％‑80％；（12）以16000r/min，离心30min，收集沉淀物，用无水乙醇及丙酮各洗涤2次；（13）用无热原蒸馏水溶解沉淀后即得。