[发明专利]高效成熟天山云杉体细胞胚成熟培养基

摘要

本发明提供高效成熟天山云杉体细胞胚成熟培养基，所述培养基为BM+3%蔗糖、MSG+3%蔗糖、1/2BLG+3%蔗糖或1/2BLG+3%麦芽糖培养基。本发明报道了天山云杉体细胞胚成熟阶段的技术研究，确定四种天山云杉体细胞胚成熟的培养基：BM+3%蔗糖，MSG+3%蔗糖，1/2BLG+3%蔗糖和1/2BLG+3%麦芽糖；其中最佳天山云杉体细胞胚成的熟培养基为：即1/2BLG+3%麦芽糖，并提出天山云杉的培养条件。本发明为实现天山云杉体细胞胚培养的更广泛应用提供坚实的理论基础，同时建立了天山云杉体细胞胚胎成熟培养的技术平台，为天山云杉遗传改良种质创新、缩短育种周期奠定了研究基础。

主权项

高效成熟天山云杉体细胞胚成熟培养基，其特征在于：所述培养基为BM+3%蔗糖、MSG+3%蔗糖、1/2BLG+3%蔗糖或1/2BLG+3%麦芽糖培养基；其中，（1）所述BM+3%蔗糖培养基的配方为：大量元素氯化钙(CaCl2·2H2O) 134.5mg/L硫酸镁(MgSO4·7H2O) 400mg/L磷酸二氢钾（KH2PO4） 340mg/L微量元素四水硫酸锰（MnSO4·4H2O） 11.15mg/L一水硫酸锰（MnSO4·H2O） 20.8mg/L七水硫酸锌(ZnSO4·7H2O) 8mg/L硼酸(H3BO3) 5mg/L碘化钾(KI) 1mg/L六水氯化钴(CoCl2·6H2O) 0.025mg/L五水硫酸铜(CuSO4·5H2O) 0.024mg/L二水钼酸钠(Na2MoO4·2H2O) 0.2mg/L铁盐乙二胺四乙酸铁钠（FeNaEDTA） 75.1mg/L（FeSO4·7H2O为27.8mg/L；Na2EDTA为37.3mg/L）蔗糖（Saccharose） 30g/L有机物肌醇(Myo‑Inositol) 1000mg/L烟酸(Nicotinie Acid) 0.25mg/L盐酸吡哆醇(Pyridoxine‑HCl) 0.25mg/L盐酸硫胺素(Thiamine‑HCl) 0.5mg/LL‑甘氨酸（Glycine） 1mg/L聚乙二醇4000（PEG4000） 75000mg/L激素脱落酸（Abscisic acid，ABA） 1.9‑38μML‑谷氨酰胺（L‑Glutamine） 450ml/L酪蛋白水解物(Casein Hydrolsate) 500mg/L（2）所述MSG+3%蔗糖培养基的配方为：大量元素硝酸钾(KNO3) 100mg/L氯化钙(CaCl2·2H2O) 440mg/L硫酸镁(MgSO4·7H2O) 320mg/L氯化钾（KCl） 745mg/L磷酸二氢钾（KH2PO4） 170mg/L微量元素四水硫酸锰（MnSO4·4H2O） 22.3mg/L七水硫酸锌(ZnSO4·7H2O) 8.6mg/L硼酸(H3BO3) 6.2mg/L碘化钾(KI) 0.83mg/L六水氯化钴(CoCl2·6H2O) 0.025mg/L五水硫酸铜(CuSO4·5H2O) 0.025mg/L二水钼酸钠(Na2MoO4·2H2O) 0.25mg/L铁盐乙二胺四乙酸铁钠（FeNaEDTA） 75.1mg/L（FeSO4·7H2O为27.8mg/L；Na2EDTA为37.3mg/L）蔗糖（Saccharose） 30g/L有机物肌醇(Myo‑Inositol) 100mg/L烟酸(Nicotinie Acid) 0.5mg/L盐酸吡哆醇(Pyridoxine‑HCl) 0.5mg/L盐酸硫胺素(Thiamine‑HCl) 1.0mg/L聚乙二醇4000（PEG4000） 75000mg/L激素脱落酸（Abscisic acid，ABA） 1.9‑38μML‑谷氨酰胺（L‑Glutamine） 1460mg/L（3）所述1/2BLG+3%麦芽糖或+3%蔗糖培养基的配方为：大量元素硝酸钾(KNO3) 50mg/L氯化钙(CaCl2·2H2O) 220mg/L硫酸镁(MgSO4·7H2O) 160mg/L氯化钾（KCl） 372mg/L磷酸二氢钾（KH2PO4） 85mg/L微量元素四水硫酸锰（MnSO4·4H2O） 11.15mg/L七水硫酸锌(ZnSO4·7H2O) 4.3mg/L硼酸(H3BO3) 3.1mg/L碘化钾(KI) 0.42mg/L六水氯化钴(CoCl2·6H2O) 0.013mg/L五水硫酸铜(CuSO4·5H2O) 0.013mg/L二水钼酸钠(Na2MoO4·2H2O) 0.13mg/L铁盐乙二胺四乙酸铁钠（FeNaEDTA） 32.55mg/L（FeSO4·7H2O为13.9mg/L；Na2EDTA为18.65mg/L）麦芽糖（Maltose）或蔗糖（Saccharose） 30g/L有机物肌醇(Myo‑Inositol) 100mg/L烟酸(Nicotinie Acid) 0.5mg/L盐酸吡哆醇(Pyridoxine‑HCl) 0.5mg/L盐酸硫胺素(Thiamine‑HCl) 0.1mg/LL‑甘氨酸（Glycine） 2mg/L聚乙二醇4000（PEG4000） 75000mg/L激素脱落酸（Abscisic acid，ABA） 1.9‑38μML‑谷氨酰胺（L‑Glutamine） 750mg/LL‑天冬酰胺（L‑Asparagine） 50mg/L。