[发明专利]一种评价污泥臭氧处理过程中活菌含量和组成的方法

摘要

一种评价污泥臭氧处理过程中活菌含量和组成的方法，涉及水处理领域。该方法通过ATP检测方法检测不同臭氧处理过程中污泥中活菌总量变化，对于有意义的臭氧处理污泥进行PMA辅助的PCR测序分析，完成臭氧处理后污泥中活菌组成分析。本检测方法可以快速分析不同臭氧处理条件下污泥中活菌杀灭效果，从而用于臭氧运行效果评价和优化；同时，可以进行活菌组成分析进行污泥臭氧氧化处理的微生态响应机制研究。

主权项

1.一种评价污泥臭氧处理过程中活菌含量和组成的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对臭氧处理后的污泥进行均一化处理，用10倍体积的Ringer1/4溶液进行稀释，1ml针管吹打10次；然后再用10倍体积的Ringer1/4溶液稀释于玻璃管中，超声波清洗机加入超纯水，超声45s，涡旋10s，共9个循环，据能量密度计算，控制消耗能量在16000J·L^‑1；(2)根据固体物质含量进行适当稀释后进行ATP检测:将步骤(1)处理好的污泥样品和ATP提取剂分别置于38℃水浴中至少1min；在500μl污泥样品中加入50μlATP提取液后，在水浴保持100s，立即测定荧光值，得到总ATP荧光值；用0.1μm无菌滤膜过滤上述测定总ATP荧光值之后的样品，测量滤液ATP荧光值，得到胞外ATP荧光值；活菌ATP荧光值＝总ATP荧光值‑胞外ATP荧光值从而得到污泥臭氧处理过程中活菌含量；采用ATP依赖性的荧火虫发光素酶(Firefly Luoiferase)催化荧火虫发光素(Firefly Luciferin)氧化发光反应作为活菌的标志快速检测ATP含量；(3)基于ATP检测结果，针对步骤(2)臭氧处理前后ATP含量有变化的污泥，加入PMA并在强光照条件下处理：对步骤(1)对应均一化处理后的污泥使用磷酸盐缓冲液稀释至1000mg/L，取1ml稀释后污泥加入PMA染料至PMA终浓度为50uM，冰上暗育10min，然后650瓦强光照射下反应10min，照射过程降温保证反应温度<5℃；处理污泥，使用试剂盒进行总DNA提取，并进行16s rRNA基因PCR扩增，并对PCR扩增产物进行测序分析，对于测序结果使用质控和群落组成分析，然后得出污泥臭氧处理过程中活菌组成。