[发明专利]一种鲨鱼软骨中具有生物活性Ⅱ型胶原蛋白的制备方法

摘要

本发明公开了一种鲨鱼软骨中具有生物活性Ⅱ型胶原蛋白的制备方法。步骤如下：鲨鱼软骨处理后经冷冻干燥，将其粉碎成80‑200目的粉末，采用氢氧化钠处理、限制条件下胃蛋白酶水解、氯化钠盐析、透析、冷冻干燥等过程后得到纯度较高的Ⅱ型胶原蛋白。本发明方法操作简单易于提取、安全性更高、应用范围更广，且获得的Ⅱ型胶原蛋白生物活性未遭破坏，具有作为生物功能物质的优良特性。

主权项

一种鲨鱼软骨中具有生物活性Ⅱ型胶原蛋白的制备方法，包括如下步骤：(1)获取鲨鱼软骨材料，将获取的软骨处理清洗后切成3‑5mm薄片，将切碎的软骨薄片冷冻干燥；(2)再将冷冻干燥后的软骨粉碎成80‑200目的粉末；(3)将鲨鱼软骨粉与0.1‑0.2mol/L NaOH 1：5‑15体积比混合，进行充分搅拌，每2‑3小时更换一次碱液，搅拌结束后用去离子水反复洗涤，直至pH为7.0‑7.6,再用0.5‑1mol/L，pH7.0‑7.6EDTA溶液连续搅拌除去矿物质，每8‑10h更换一次溶液，搅拌结束后用20‑30倍体积的去离子水连续搅拌10‑20min，共2‑5次，最后得到去除杂质后胀润的鲨鱼软骨粉；(4)将步骤(3)所得的胀润的鲨鱼软骨粉与用0.5‑1mol/L乙酸配成的1‑2％胃蛋白酶液以1：10‑20体积比混合，经过充分搅拌后，6000‑10000rpm离心，取上清液，用NaOH将pH调至7.4‑7.6；加入NaCl盐析，并搅拌使Ⅱ型胶原蛋白充分析出，6000‑10000rpm离心得沉淀；透析，沉淀用的0.5‑1mol/L乙酸使之恰好溶解，用20‑30倍体积的0.1‑0.2mol/L乙酸透析12‑36h，再用20‑30倍体积的去离子水透析24‑72h；透析液冷冻干燥后保藏，得到具有生物活性的Ⅱ型胶原蛋白。