[发明专利]一种防治鸡传染性支气管炎的中药制剂的检测方法

摘要

本发明提供了一种防治鸡传染性支气管炎的中药制剂的检测方法，其由以下原料药制备而成的：黄芩、连翘、栀子、金银花、广藿香、柴胡、浙贝母的中药制剂的质量检测方法，包括鉴别和含量测定项目。本发明建立的七味药的薄层色谱鉴别方法，斑点清晰，重现性好，阴性无干扰，可作为本中药组合物的质量控制方法；建立的黄芩苷的含量测定方法，精密度高，测量结果准确，可有效的控制产品的质量，从而确保其临床疗效。

主权项

1.一种防治鸡传染性支气管炎的中药制剂的检测方法，该中药制剂由以下重量份数的原料药制备而成的：100～200份黄芩、100～200份连翘、100～200份栀子、100～200份广藿香、50～150份金银花、50～150份浙贝母、10～100份柴胡，其特征在于，所述检测方法包括薄层色谱鉴别，其中，鉴别是对制剂中黄芩和金银花，连翘，栀子，广藿香，柴胡，浙贝母的薄层色谱鉴别，具体为：1)黄芩、金银花薄层色谱鉴别取相对于含黄芩生药材量0.3g或相对于含金银花生药材量0.2g的样品，加甲醇溶解并稀释至10mL，摇匀，过滤，滤液作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品适量，加70％乙醇制成浓度为1.0mg/mL的黄芩苷对照品溶液；取绿原酸对照品适量，加乙醇制成浓度为0.1mg/mL绿原酸对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述黄芩苷对照品溶液4μL 、绿原酸对照品溶液1μL 、供试品溶液2μL ，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点；2)连翘薄层色谱鉴别当连翘为提取入药时，取相当于含连翘生药材量1.5g的样品固体，加样品量2倍量热水使溶解，离心，取上清液，加水饱和的正丁醇萃取2次，30mL/次，合并正丁醇萃取液，再用氨试液洗2次，20mL/次，用水洗2次，20mL/次，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇2mL溶解，用100～200目的中性氧化铝3g拌匀，加40％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；当连翘为提取入药时，取相当于含连翘生药材量1.5g的样品液体，加水饱和的正丁醇萃取2次，30mL/次，合并正丁醇萃取液，再用氨试液洗2次，20mL/次，用水洗2次，20mL/次，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇2mL溶解，用100～200目的中性氧化铝3g拌匀，加40％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；当连翘为原粉入药时，取相当于含连翘生药材量1.5g的样品固体，加样品量5倍量热水煎煮30分钟，过滤，滤液浓缩至15mL，加水饱和的正丁醇萃取2次，30mL/次，合并正丁醇萃取液，再用氨试液洗2次，20mL/次，用水洗2次，20mL/次，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇2mL溶解，用100～200目的中性氧化铝3g拌匀，加40％甲醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取连翘对照药材1.5g，用150mL水煎煮30分钟，过滤液浓缩至15mL，用水饱和的正丁醇萃取2次，30mL/次，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加1mL甲醇使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯‑丙酮‑乙酸乙酯‑甲酸‑水=4∶5∶6∶0.6∶0.6为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；3)栀子薄层色谱鉴别取步骤2)中连翘薄层色谱鉴别下供试品溶液；另取栀子苷对照品适量，加乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各4μL ，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯‑丙酮‑甲酸‑水=5∶5∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；4)广藿香薄层色谱鉴别当广藿香为原粉入药时，取相当于含广藿香生药材1g的样品固体，加样品量2倍量的正己烷，超声提取15分钟，滤过，滤液浓缩至1mL，作为供试品溶液；当广藿香为提取后入药时，取相当于含广藿香生药材4.5g的样品液体，加正己烷萃取两次，每次加样品量的2倍量，合并正己烷液，挥至1mL，作为供试品溶液；当广藿香为提取后入药时，取相当于含广藿香生药材4.5g的样品固体，加正己烷50mL，超声提取15分钟，滤过，滤液浓缩至1mL，作为供试品溶液；另取广藿香对照药材1g，加正己烷30mL，超声提取15分钟，滤过，滤液浓缩至1mL，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液、供试品溶液各2～5μL ，分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸点60～90℃的石油醚‑丙酮=9∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；5)柴胡薄层色谱鉴别取步骤2)中连翘薄层色谱鉴别下供试品溶液；取柴胡对照药材0.5g，加水30mL回流1.5小时，过滤，滤液按供试品溶液制备方法制备，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取对照药材溶液、供试品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷‑甲醇‑水=13∶7∶2零下20℃以下放置1小时的下层溶液为展开剂，在10℃以下展开，取出，晾干，喷以10％对二甲氨基苯甲醛的10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；置日光下和紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；6)浙贝母薄层鉴别当样品为固体时，取相当于含浙贝母生药材1g的样品粉末，加样品重量1倍的浓氨试液，混匀，放置0.5小时，加样品量2～10倍量三氯甲烷，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解至1mL，作为供试品溶液；当样品为液体时，取相当于含浙贝母生药材1g的样品液体，加浓氨试液5mL，混匀，放置0.5小时，加三氯甲烷萃取两次，每次25mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙醇溶解至1mL，作为供试品溶液；另取浙贝母对照药材1g，加浓氨试液5mL，混匀，放置0.5小时，加三氯甲烷30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶解至1mL，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述二种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯‑甲醇‑氨水=17∶2∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。