[发明专利]一种快速筛选高产虾青素红法夫酵母菌株的方法在审
| 申请号： | 201610988129.7 | 申请日： | 2016-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN107779448A | 公开（公告）日： | 2018-03-09 |
| 发明（设计）人： | 任迪峰;马珺;申灿灿;王璟悦 | 申请（专利权）人： | 北京林业大学 |
| 主分类号： | C12N13/00 | 分类号： | C12N13/00;C12R1/645 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100083 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明是一种快速筛选高产虾青素红法夫酵母菌株(Phaffia rhodozyma CGMCC2.1557)的方法。具体步骤如下1)野生型红法夫酵母菌株活化后恒温培养箱中22～25℃培养，取少量单菌落加入种子培养基中，120～130r/min摇床培养；2)常压恒压室温等离子束(ARTP)诱变野生型红法夫酵母菌株150～180s；3)诱变后菌液转入离心管中，梯度稀释，涂平板；4)菌株转接到24孔板，摇床培养45～50h，激光扫描共聚焦显微镜观察，筛选候选突变菌株；5)种子培养基中摇床培养；6)种子液成比例接入发酵培养基中摇床培养；7)超声法提取虾青素，超声时间为1～1.2h，高效液相色谱法检测发酵液中虾青素含量；8)筛出高产虾青素突变株，产率较野生型提高了25～55％。本发明应用两步法筛选高产虾青素红法夫酵母菌株菌落颜色初筛与细胞荧光强度复筛，这种方法操作简单、安全、无污染，且诱变菌株较稳定，降低工业生产的成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 快速 筛选 高产 虾青素红法夫 酵母 菌株 方法 | ||
【主权项】：
一种快速筛选高产虾青素红法夫酵母菌株(Phaffia rhodozyma CGMCC2.1557)的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：①活化：野生型红法夫酵母菌株活化后在恒温培养箱中培养,培养温度为22～25℃，时间为120～130h；②诱变：取野生型单菌落菌株加入种子培养基，摇床培养，利用常压恒压室温等离子束(ARTP)诱变150～180s，诱变的菌液梯度稀释后涂平板，固体培养基中培养；③初筛：单菌落转接到24孔板中液体培养，筛选深橙色突变菌株作为候选突变菌株；④复筛：候选突变菌株制成临时装片，激光扫描共聚焦显微镜观察，比较突变菌株细胞荧光强度；⑤培养：突变菌株至种子液中摇床培养3d后，接入发酵培养基，摇床培养3d；⑥提取：发酵液离心后留沉淀，加入丙酮，22～27℃超声处理1～1.2h，取上清备测；⑦定量验证：高效液相色谱法测发酵液中虾青素含量，流动相V甲醇：V乙腈＝9：1～1.5；⑧通过对红法夫酵母突变菌株定量分析，虾青素产量较野生型菌株产量增加了25～55％。
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