[发明专利]一种灰兜巴多糖及其制备方法

摘要

本发明公开了一种灰兜巴多糖及其制备方法，该方法包括以下步骤：提取灰兜巴粗多糖；灰兜巴中性多糖的收集；灰兜巴酸性多糖的收集；将灰兜巴中性多糖和灰兜巴酸性多糖进行分离与纯化，制备得到纯化后的灰兜巴多糖，即为灰兜巴多糖。本发明采用乙醇除杂脱脂，再水提的提取方法，比传统水提醇沉法所得多糖的复溶率更高，可提高多糖得率。本发明两次纯化可提高灰兜巴多糖的纯度，从而提高活性。

主权项

1.一种灰兜巴多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、提取灰兜巴粗多糖；步骤2、灰兜巴中性多糖的收集；步骤3、灰兜巴酸性多糖的收集；步骤4、将灰兜巴中性多糖和灰兜巴酸性多糖进行分离与纯化，制备得到纯化后的灰兜巴多糖，即为灰兜巴多糖；所述提取灰兜巴粗多糖具体为：步骤1.1、前处理：将灰兜巴样品洗净在50‑60℃烘干箱中干燥，用中草药粉碎机粉碎，过10目至65目筛，制备得到灰兜巴粗粉；步骤1.2、取灰兜巴粗粉，按照料液比1:8‑1:12g/mL加入体积分数为95％‑100％的乙醇，微沸4‑6小时，提取3次，至提取液无色；残渣用体积分数为45％‑55％的乙醇，按照料液比1:8‑1:12g/mL，微沸4‑6小时提取至无色；残渣加蒸馏水，按照料液比1:8‑1:12g/mL，微沸提取1.5‑2.5小时，提取两次，滤液浓缩至干或近干于烧瓶中，放入‑80℃冰箱冻成冰，冷冻干燥，制备得到灰兜巴粗多糖样品；所述步骤2中的灰兜巴中性多糖的收集具体为：取步骤1制备得到的灰兜巴粗多糖样品，加蒸馏水定容，灰兜巴粗多糖样品占定容总量的1:5‑1:15g/mL，装入处理好的分子量为3500的透析袋中，两端用夹子夹好透析，一天换两次水，透析至无颜色；透析后的样品3000‑4000r/min离心5‑10min，用滤头过滤，放入4℃冰箱中保存；取1/2的样品上样，用DEAE琼脂糖凝胶FF柱分离纯化；洗脱液为蒸馏水，流速2mL/min，收集洗脱液，浓缩，冷冻干燥，得灰兜巴中性多糖；所述步骤3中的灰兜巴酸性多糖的收集具体为：收集中性多糖后，继续用蒸馏水洗柱子2小时，以0‑1.5mol/L的氯化钠溶液进行梯度洗脱，用电脑自动部分收集器收集洗脱液，采用苯酚—硫酸法测定多糖含量，制定多糖含量曲线，收集特征峰，浓缩至100ml，装入透析袋透析，6小时换水一次，透析至透析桶里的水不再使硝酸银溶液产生沉淀为止，再浓缩近干，冷冻干燥，得不同分子量的灰兜巴酸性多糖。