[发明专利]一种丁酸梭菌和丁酸梭菌活菌制剂的制备及应用

摘要

本发明公开了一株丁酸梭菌及丁酸梭菌活菌制剂生产方法，丁酸梭菌(Clostridium butyricum)LXKJ‑1，2016年3月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 201613。同时还公布了该菌株的种子培养基、发酵培养基配方、培养条件及其活菌制剂的生产方法。本发明提供的丁酸梭菌耐酸、耐碱、耐高温，产丁酸能力强，对大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄杆菌、单增李斯特菌、产气荚膜梭菌等动物病原菌都具有抑制作用，可预防畜禽由大肠杆菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌等引起的腹泻，改善肠道菌群平衡，促进畜禽生长，缓解母猪便秘，提高蛋鸡蛋重，改善蛋鸡蛋壳质量，降低料蛋比。

主权项

一种丁酸梭菌LXKJ‑1制备的丁酸梭菌活菌制剂，所述丁酸梭菌，名称为LXKJ‑1，分类名称为：丁酸梭菌 LXKJ‑1 （Clostridium butyricum）LXKJ‑1，保藏编号为：CCTCC NO:M201613，保藏日期：2016年3月24日，保藏地址为：中国，武汉，武汉大学，保藏单位：中国典型培养物保藏中心；其特征在于，由包括以下步骤的方法制备：①将丁酸梭菌(Clostridium butyricum)LXKJ‑1保藏在甘油管中，冷冻保藏，通过划线法接入斜面培养基，在厌氧条件下，35～37 ℃培养20～24h，用无菌生理盐水洗下芽孢悬液，作为原始菌液；②将原始菌液为菌种进行扩增培养，其具体步骤如下：将1体积的菌悬液接入到20体积的一级种子培养基中，于1L蓝盖试剂瓶中，厌氧条件下、35～37 ℃培养8～12 h，做为一级种子液；将1体积的一级种子液接入到10体积的二级种子培养基中，于20L发酵罐中，氮气环境下、35～37 ℃培养8～12h，作为二级种子液；将二级种子液移入20倍体积的三级发酵培养基中，于200L发酵罐中，氮气环境下、35～37 ℃培养20～24h，即得到丁酸梭菌(Clostridium butyricum)LXK J‑1的培养物；③采用高速离心法对培养物进行菌体收集，离心收集的菌泥；④按1:1～5的比例添加5～20%的脱脂奶粉悬液、蔗糖、乳糖、海藻糖、麦芽糊精、山梨醇、甘油中的一种或一种以上的组合作为冻干保护剂，采用冷冻干燥法制备冻干菌体；⑤使用葡萄糖、淀粉、石粉、沸石粉、豆粕粉、玉米芯粉、麸皮粉中的一种或一种以上的组合作为辅料对菌粉进行稀释，根据需要，配制成不同活菌数的丁酸梭菌活菌制剂；所述一级种子培养基为：葡萄糖5～30 g/L，L‑半胱氨酸0.1～5g/L，硫代乙醇酸钠0.1～5g/L，K₂HPO₄ 0.1～5 g/L，酵母浸粉1～10g/L，大豆蛋白胨5～20g/L，NaCl1～10g/L，海藻酸钠1～10g/L，pH 6.5～7.0；所述二级种子培养基为：蛋白胨10～40g/L，豆饼粉1～5g/L，葡萄糖10～30g/L，KNO₃ 0.5～2.0 g/L，K₂HPO₄0.5～2.0g/L，MgSO₄ 0.1～0.5g/L，MnSO₄0.1～0.5g/L，L‑半胱氨酸0.1～1.0g/L，海藻酸钠1.0～10g/L，尿素1.0～5.0g/L，CaCO₃1.0～10g/L，pH6.5～7.0；所述三级发酵培养基为：玉米粉10～40g/L，豆饼粉1～5g/L，胰蛋白胨10～40g/L，葡萄糖10～40g/L，NH₄NO₃ 0.5～2.0g/L，K₂HPO₄ 0.5～2.0 g/L，MgSO₄ 0.1～0.5 g/L，MnSO₄ 0.1～0.5 g/L，L‑半胱氨酸 0.1～1.0 g/L，海藻酸钠1.0～10g/L，尿素1.0～5.0 g/L，CaCO₃ 1.0～10g/L，pH6.5～7.0；以上所有的培养基在使用前都需要蒸汽灭菌121 ℃，30 min，冷却待用。