[发明专利]一种采用壳聚糖吸附法制备高纯度藻红蛋白的方法

摘要

本发明提供一种操作简便、成本低廉且易于大规模工厂化生产，从紫球藻中制备高纯度藻红蛋白的方法。本发明采用的壳聚糖吸附法制备高纯度藻红蛋白的方法，与传统技术相比省去了柱层析的步骤，操作方法简便易行，成本低廉，回收率高，纯度高，并且经过了实验室放大设备的验证。采用本发明方法得到的藻红蛋白纯度A545/A280>4.0，达到了分析级要求，为藻红蛋白应用于生物医学分析和免疫化学等领域奠定了基础。

主权项

一种从紫球藻中制备高纯度藻红蛋白的方法，其特征在于以下步骤，(1)离心收集新鲜培养的紫球藻，将藻泥与磷酸盐缓冲液按1:5～1:10比例充分混匀，得细胞悬液；(2)将步骤(1)所得细胞悬液反复冻融5～7次，得到破壁液；将破壁液按照10000r/min冷冻离心10min,收集上清液；(3)将步骤(2)所得上清液中逐滴加入壳聚糖溶液，至混合溶液中的壳聚糖质量浓度为0.2％～1.5％，然后充分混匀后按照10000r/min冷冻离心10min，取沉淀；向沉淀中加入含0.1mol/L氯化钠的磷酸盐缓冲液，充分混匀后按照10000r/min冷冻离心10min，取沉淀；接着向沉淀中加入含0.3mol/L氯化钠的磷酸盐缓冲液，充分混匀后按照10000r/min冷冻离心10min，取上清液；(4)室温下将步骤(3)所得上清液超滤，然后收集滤液，并将滤液冷冻干燥，即得到纯化的藻红蛋白；其中，所述步骤(1)和步骤(3)中用的磷酸盐缓冲液为pH为6.8～7.0，浓度为0.01～0.02mol/L的磷酸盐缓冲液；所述步骤(3)中所用的壳聚糖溶液为pH值为4.5～5.0，浓度为0.03g/ml的壳聚糖溶液。