[发明专利]甘肃陇南大红袍花椒提取物组分及其制备方法与检测方法

摘要

本发明属于植物提取物领域，涉及一种具有麻醉作用的甘肃陇南大红袍花椒提取物组分及其制备方法与检测方法。该提取物是采用如下方法制备的(1)将花椒粉碎，置烘箱内烘干后，加50％～60％丙酮水溶液，于水浴回流提取，提取液回收丙酮，得到花椒总提取物浸膏；(2)将得到的花椒总提取物浸膏以氯仿甲醇＝505的混合溶液在水浴条件下搅拌溶解，过滤，滤液在水浴中减压浓缩后进行柱层析分离；(3)选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为17～9，上样体积6BV～8BV，水洗4BV～6BV除杂，以乙酸乙酯丙酮＝1005的洗脱剂7BV～9BV洗脱，流速为2BV/h～4BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。

主权项

一种具有麻醉作用的甘肃陇南花椒提取物，其特征在于，该花椒提取物是采用如下方法制备的：（1）将花椒粉碎，置烘箱内40℃～50℃烘干3h～5h后，加15～25倍量50%～60%丙酮水溶液，于60℃～70℃水浴回流提取2次～4次，每次70min～80min，合并提取液，回收丙酮，得到花椒总提取物浸膏；（2）将得到的花椒总提取物浸膏以氯仿:甲醇=50:5的混合溶液在40℃～50℃水浴条件下搅拌溶解，过滤，滤液在40℃～50℃水浴中减压浓缩后进行柱层析分离；（3）选用D101B型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:7～9，上样体积6BV～8BV，水洗4BV～6BV除杂，以乙酸乙酯:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液=100:5的洗脱剂7BV～9BV洗脱，流速为2BV/h～4BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得；采用高效液相色谱法对该花椒提取物中的单叶芸香品碱进行含量测定，测定方法为：（1）色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的乙腈‑水；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min‑1；进样量：10μL；（2）对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的单叶芸香品碱对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；（3）供试品溶液的制备：精密称取花椒提取物10mL，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；（4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测；采用气相色谱法对该花椒提取物中的香桧烯、葎草烯进行含量测定，测定方法为：（1）色谱条件：色谱柱：ZB‑WAX弹性石英毛细管柱；载气：N2，1.0mL·min‑1；氢气，40mL·min‑1；空气，400mL·min‑1；分流比：8：1；进样口温度：250℃，检测器温度300℃；程序升温：初始80℃，每分钟5℃升至120℃，每分钟10℃升至180℃，保持3.5min；内标法；（2）内标溶液的制备：取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每1mL含12.5mg的溶液，摇匀，作为内标溶液；（3）供试品溶液的制备：精密量取花椒提取物1.0g，置10mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量取1.0mL，置10mL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；（4）对照品溶液的制备：精密称取香桧烯对照品、葎草烯对照品适量，加无水乙醇溶解并稀释制成含香桧烯0.301mg·mL‑1及葎草烯0.901mg·mL‑1的对照品储备溶液，备用；（5）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入气相色谱仪，进行检测。