[发明专利]一种防治糖尿病并控制体重的复合益生菌制剂的制备方法

摘要

本发明公布了一种防治糖尿病并控制体重的复合益生菌制剂的制备方法，具体是一种利用益生菌、益生元与二甲双胍复合而成的防治糖尿病并控制体重的复合益生菌制剂及其制备方法；将丁酸梭菌，布拉氏酵母菌，罗伊氏乳杆菌，婴儿双歧杆菌，地衣芽孢杆菌等有益菌；以及阿拉伯糖，低聚木糖等益生元与二甲双胍结合起来，以避免二甲双胍而引起的恶心、呕吐、腹泻、腹痛、便秘、腹胀、消化不良、胃灼热、肠易激综合症等症状有良好的疗效，并通过直接吸收利用葡萄糖，加速葡萄糖代谢，提高对控制体重与糖尿病的治疗效果。本发明的复合益生菌制剂在改善二甲双胍药物胃肠道不良反应方面比单纯应用二甲双肌者效果显著。

主权项

一种防治糖尿病并控制体重的复合益生菌制剂，其特征在于：所述复合益生菌组份及重量份数配比为：10亿CFU/g丁酸梭菌10‑20份、10亿CFU/g布拉氏酵母菌10‑40份、50亿CFU/g罗伊氏乳杆菌5‑15份、10亿CFU/g婴儿双歧杆菌10‑20份、100亿CFU/g地衣芽孢杆菌10‑20份、二甲双胍8‑12份、阿拉伯糖10‑20份、低聚木糖5‑15份，可溶性淀粉10‑20份；其制备过程包括：在无菌搅拌罐中依次加入10亿CFU/g丁酸梭菌10‑20份、10亿CFU/g布拉氏酵母菌10‑40份、50亿CFU/g罗伊氏乳杆菌5‑15份、10亿CFU/g婴儿双歧杆菌10‑20份、100亿CFU/g地衣芽孢杆菌10‑20份、可溶性淀粉10‑20份搅匀30分钟；然后再加入二甲双胍8‑12份、阿拉伯糖10‑20份、低聚木糖5‑15份继续搅拌，直到完全混匀后，即可分装5g/袋；即为防治糖尿病并控制体重的复合益生菌制剂；其中，所述的布拉氏酵母、罗伊氏乳杆菌、丁酸梭菌、地衣芽孢杆菌、婴儿双歧杆菌按以下方法培养：布拉氏酵母的制备取出菌种保藏管，用YPD固体培养基划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种150毫升YPD培养基中，在培养箱中30℃震荡培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装有350L酵母菌培养基的 500L发酵罐中，控温30℃，开搅拌200r/min,前10小时，通气量为每分钟100L，10小进后，通气量为每分钟300L，培养20‑28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过20亿CFU/ml，即可加入脱脂奶粉，真空冷冻干燥，调节布拉氏酵母菌含量为10亿CFU/g，即可；其中所述的YPD培养基：酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂20 g，水1000mL；其中，所述的酵母菌培养基：红糖15 g/L，酵母膏3 g/L，蛋白胨5 g/L，硫酸铵3 g/L，硫酸镁0.5 g/L，各培养基灭菌的条件为：0.10‑0.15MPa，121℃灭菌30分钟；罗伊氏乳杆菌的制备取出菌种保藏管，用MRS固体培养基划平板进行复苏，37℃厌氧培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种250毫升MRS培养基中，在培养箱中37℃厌氧培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装有450L乳酸菌培养基的 500L发酵罐中，37℃厌氧培养20‑28小时，检测其菌液浓度，菌含量超过100亿CFU/ml，即可加入脱脂奶粉，真空冷冻干燥，调节罗伊氏乳杆菌含量为50亿CFU/g，即可；其中所述的MRS固体培养基：蛋白胨10g/L，酵母提取物5 g/L，牛肉膏10 g/L，葡萄糖20 g/L，醋酸钠5 g/L，柠檬酸二铵2 g/L，吐温‑80 1 ml/L，硫酸镁0.6 g/L，硫酸锰0.05 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，琼脂20 g/L，碳酸钙20 g/L；其中所述的乳酸菌培养基：葡萄糖4%，蛋白胨1.2%，牛肉膏0.75%，氯化钠0.1%，硫酸锰0.001%，硫酸镁0.02%，醋酸钠0.05%，碳酸钙1%，pH6.0；各培养基灭菌的条件为：0.10‑0.15MPa，121℃灭菌30分钟；地衣芽孢杆菌的制备取出菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，37℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种500毫升LB培养基中，在培养箱中37℃震荡培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至装有350L地衣芽孢杆菌液体培养基的 500L发酵罐中，控温37℃，开搅拌200r/min,前10小时，通气量为每分钟200L，10小进后，通气量为每分钟400L，培养32‑48小时，检测其菌液浓度，芽孢含量超过120亿CFU/ml，即可加入碳酸钙粉，喷雾干燥，调节地衣芽孢杆菌含量为100亿CFU/g，即可，其中所述LB固体培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂20 g，水1000mL，pH7.2，其中所述地衣芽孢杆菌液体培养基：葡萄糖10g/L，玉米淀粉10 g/L， 豆粕粉30 g/L，硫酸镁0.5 g/L，硫酸锰0.5 g/L，磷酸二氢钠0.5 g/L，氯化钠2 g/L，pH7.2，各培养基灭菌的条件为：0.10‑0.15MPa，121℃灭菌30分钟；婴儿双歧杆菌的制备取出菌种保藏管，用双歧杆菌固体培养基划平板进行复苏，37℃厌氧培养72小时，在平板下挑取单个菌落接种500毫升双歧杆菌培养基中，在培养箱中37℃厌氧培养48小时，种子采用5%的接种量，接种至装有450L双歧杆菌培养基的 500L发酵罐中，37℃厌氧培养40‑48小时，检测其菌液浓度，菌含量超过20亿CFU/ml，即可加入脱脂奶粉，真空冷冻干燥，调节双歧杆菌菌体含量为10亿CFU/g，即可；其中所述的双歧杆菌培养基：蛋白胨5.0g/L，酵母提取物5 g/L，牛肉膏5.0 g/L，胰蛋白胨10.0g/L，葡萄糖10.0 g/L，醋酸钠5.0 g/L，柠檬酸二铵2.0 g/L，吐温‑80 1.0 ml/L，硫酸镁0.1 g/L，硫酸锌0.25 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，固体培养基中加入琼脂2%；培养基灭菌的条件为：0.10‑0.15MPa，121℃灭菌30分钟；丁酸梭菌的制备取‑80℃甘油管保藏的菌种1mL接种于装有999mLRCM培养基的厌氧瓶中，37℃条件下静态厌氧活化64h，将活化好的菌种按1%(v/v)的接种量转接到灭过菌的99L丁酸梭菌发酵培养基中，37℃条件下静态厌氧培养64h~126h，芽孢含量超过15亿CFU/ml，即可加入脱脂奶粉，真空冷冻干燥，调节丁酸梭菌芽孢含量10亿CFU/g，即可；其中，所述的RCM培养基：胰蛋白陈10g/L，牛肉膏10g，酵母膏10g/L，葡萄糖5g/L，氯化钠5g/L，可溶性淀粉1g/L，半胱氨酸盐酸盐0.5 g /L，醋酸钠3g/L，pH7.0，121℃灭菌20min；其中，所述的丁酸梭菌发酵培养基：:酵母膏15g/L，牛肉膏5g/L，KH2PO4 2g/L硫酸镁1g/L，半胱氨酸盐酸盐1g/L，NaHCO3 1g/L，CaCO3 1g/L，葡萄糖20g/L， PH7.0，121℃灭菌20min。