[发明专利]一种建立油用牡丹鳞芽高效无菌培养体系的方法

摘要

本发明属于植物组织培养领域，具体提供一种建立油用牡丹鳞芽高效无菌培养体系的方法，包括如下步骤：1)采集，2)单芽茎段清洗，3)芽体剥离，4)外植体消毒，5)接种。本发明的方法以油用牡丹的鳞芽为外植体，经过严格的清洗、剥离和消毒，构建的高效无菌培养体系在启动四周后，污染率≤10％；褐化率≤20％；诱导率≥70％，解决了目前牡丹组培技术应用于生产实践时建立无菌培养体系效率低的问题。

主权项

一种建立油用牡丹鳞芽高效无菌培养体系的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)采集：于健壮油用牡丹枝条下部剪取含2‑3个饱满鳞芽的茎段，并剪成长2.5‑4厘米的单芽茎段；2)单芽茎段清洗：将单芽茎段以质量百分浓度5％的二氯异氰尿酸钠溶液浸泡后，流水洗净二氯异氰尿酸钠溶液残留，再以洗洁精刷洗后去除叶柄，仔细刷洗叶柄脱离处，流水冲洗，剥除单芽茎段的韧皮部，以体积百分比70％的酒精浸泡；3)芽体剥离：取出步骤2)处理后的单芽茎段，吸干表面液体，以酒精消毒后的刀片剥除鳞芽的鳞片，只保留最内层的一层鳞片，将刀片浸蘸50％复方苦参洗剂后，切除芽体基部皮层组织露出淡绿色维管组织，将芽体从单芽茎段上挑出，芽体基部保留少量木质部，将芽体放入盛有一薄层100mg/L青霉素钠的培养皿中；4)外植体消毒：步骤3)所得芽体以紫外消毒，再以质量百分浓度0.1％的升汞溶液消毒，以无菌水冲洗5遍以上；5)接种：将消毒后的芽体剪除最内层的鳞片，接种到启动培养基上进行培养，获得油用牡丹鳞芽高效无菌培养体系。