[发明专利]用于筛选Nrf2激活剂的重组质粒及其构建方法和用途有效
| 申请号： | 201610740286.6 | 申请日： | 2016-08-26 |
| 公开（公告）号： | CN106282229B | 公开（公告）日： | 2020-01-17 |
| 发明（设计）人： | 朱慧兰;李华平 | 申请（专利权）人： | 广州市皮肤病防治所 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66;C12Q1/66;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 44215 东莞市华南专利商标事务所有限公司 | 代理人： | 刘克宽 |
| 地址： | 510095*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及生物医药领域，具体涉及用于筛选Nrf2激活剂的重组质粒及其构建方法和用途，其中所述重组质粒包含一个或两个以上相互串联的抗氧化反应元件以及基础转录元件、分泌型荧光素酶基因、分泌型碱性磷酸酶基因。与现有技术相比，本发明采用分泌型荧光素酶作为报告基因，其检测灵敏度高，检测荧光素酶基因活性时无需裂解细胞，实现了抗氧化剂高通量的筛选和比较，以及长期效应的检测，为筛选抗氧化剂或检测抗氧化剂活性提供了一种高效、快速、简便的方法，可应用于具有抗氧化作用天然药物和人工合成的化合物的筛选。 | ||
| 搜索关键词： | 抗氧化剂 筛选 荧光素酶基因 重组质粒 分泌型 检测 分泌型碱性磷酸酶 抗氧化反应元件 生物医药领域 检测灵敏度 抗氧化作用 转录 报告基因 长期效应 裂解细胞 天然药物 荧光素酶 高通量 激活剂 构建 串联 基因 应用 | ||
【主权项】：
1.用于筛选Nrf2激活剂的重组质粒，其特征在于：所述重组质粒包含1或2或4或8个相互串联的抗氧化反应元件，以及基础转录元件、分泌型荧光素酶基因和分泌型碱性磷酸酶基因；其中：/n所述抗氧化反应元件为SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；/n1个抗氧化反应元件串联后所对应的序列为SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列；/n2个抗氧化反应元件串联后所对应的序列为SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列；/n4个抗氧化反应元件串联后所对应的序列为SEQ ID NO.11所示的核苷酸序列；/n8个抗氧化反应元件串联后所对应的序列为SEQ ID NO.12所示的核苷酸序列；/n所述分泌型荧光素酶基因是源于Gaussia princeps的分泌型荧光素酶基因；所述源于Gaussia princeps的分泌型荧光素酶基因为其野生型序列或SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列或编码SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列的核苷酸序列；/n所述分泌型碱性磷酸酶基因为SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列或编码SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列的核苷酸序列；/n所述基础转录元件为SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；/n所述重组质粒还包含有抗性基因。/n
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