[发明专利]包载SA‑mGM‑CSF或/和SA‑hTNFα的生物素化壳聚糖‑海藻酸钙微球的制备

摘要

本发明公开了一种利用双乳化法制备包载SA‑mGM‑CSF或/和SA‑hTNFα的生物素化壳聚糖‑海藻酸钙微球的制备方法，所述方法制备出来的微球表征指标良好，且能较好地保持SA‑mGM‑CSF或/和SA‑hTNFα的生物学活性。本发明摸索并确定了空载海藻酸钙微球制备的最佳配方，且成功制备了包载SA‑mGM‑CSF或/和SA‑hTNFα的生物素化壳聚糖‑海藻酸钙微球。本发明中制备出的生物素化微球通过链霉亲合素的桥连作用锚定修饰在肿瘤病灶局部，通过在肿瘤局部持续释放SA‑mGM‑CSF或/和SA‑hTNFα，从而达到增强机体抗肿瘤免疫的目的。

主权项

一种利用双乳化法制备生物素化壳聚糖‑海藻酸钙微球的方法，其方法、步骤如下：(1)用量筒量取两份体积相等的液体石蜡，按照一定比例向两份液体石蜡中分别加入乳化剂Span‑80，4℃冷库内磁力搅拌，使其分散均匀。(2)将SA‑mGM‑CSF或/和SA‑hTNFα双功能融合蛋白分散在海藻酸钠溶液中，作为内水相1，将生物素化的壳聚糖溶液分散在CaCl2溶液中得到内水相2。(3)磁力搅拌状态下，按照一定油∶水比例向其中一份液体石蜡中加入内水相1，同时向另一份液体石蜡加入内水相2，磁力搅拌乳化30min便得到均匀的w/o型乳液1、2。(4)将乳液1缓慢加入到乳液2中，继续磁力搅拌交联固化一段时间。(5)交联固化完成后，磁力搅拌状态下加入石油醚异丙醇混合液洗涤10min，静置5min分层后去掉上层乳浊液，重复洗涤2次，蒸馏水洗涤一次。(6)5000rpm 4℃离心5min，去上清后得到包载SA‑mGM‑CSF或/和SA‑hTNFα的生物素化壳聚糖‑海藻酸钙微球的沉淀。(7)制备的微球样品放于‑80℃冰箱预冻过夜，真空冷冻干燥。