[发明专利]一种牛肺依诺肝素钠及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种牛肺依诺肝素钠及其制备方法与应用。牛肺依诺肝素钠由牛肺肝素制备而来，ΔUA2S‑GlcNS6S（ΔⅠS）的含量高达75%‑83%，而ΔⅠS在（猪肠粘膜）依诺肝素钠、羊肠粘膜依诺肝素钠和牛肺依诺肝素钠中仅分别是58%‑66%、64%‑72%和50%‑58%。牛肺依诺肝素钠的生物学抗凝活性，抗‑Ⅹa、抗‑Ⅱa和两者之间的比例，以及其他的理化性质，均符合现行药典对依诺肝素钠的放行标准。本发明同时介绍了两种牛肺依诺肝素钠注射剂和制备方法，以及在动物体内抗凝试验的应用。

主权项

1.一种牛肺依诺肝素钠的制备方法，其特征在于，牛肺肝素钠提取和纯化自中国东北肉牛屠宰后的肺脏，经全绵羊血浆法抗凝活性为167.5单位每毫克；按USP39规定的精品肝素钠抗‑Ⅹa和抗‑Ⅱa活性测定方法，抗‑Ⅹa活性为128.8单位每毫克，抗‑Ⅱa活性为168.7单位每毫克，抗‑Ⅹa/抗‑Ⅱa比例为0.67；准确称取所述牛肺肝素钠20克，溶解于200毫升水中；另将50克苄索氯铵，溶解于200毫升水中，配制成澄清的苄索氯铵水溶液；于充分搅拌下，将苄索氯铵水溶液滴加至牛肺肝素钠水溶液中，30分钟内滴加完毕，继续搅拌2小时，用高速离心机6000转/分钟离心5分钟，沉淀用1600毫升水重悬，继续充分搅拌5分钟，再6000转/分钟离心5分钟，重复一次；将沉淀的牛肺肝素季铵盐，45℃鼓风干燥10小时后，转移至真空干燥箱，在60℃下真空干燥48小时；干燥后的牛肺肝素季铵盐的干燥失重为0.6％，称重为57.0克；取上述干燥后的牛肺肝素季铵盐55.0克于1升反应瓶中，加入375.0克二氯甲烷搅拌溶解，升温至38℃，加入60.5克氯化苄，全程保温30‑40℃，反应过夜，另外，称量40.0克醋酸钠，溶解于400毫升的甲醇中，在酯化反应结束后滴加至反应液中，此时产生不溶的牛肺肝素苄基酯沉淀；再加入750毫升甲醇，搅拌5分钟，静置过夜；小心地吸去上清液，下层沉降区混合物，用100目滤布抽滤，得到牛肺肝素苄基酯粗品；粗品经过用两次500毫升甲醇重悬，充分搅拌洗涤后抽滤；称取5.0克氯化钠并溶于40.0毫升水中，用该氯化钠水溶液溶解上述固体，再以400毫升的甲醇醇沉，沉淀物以离心机6000转/分钟离心5分钟收获；重复盐水溶再甲醇醇沉3次，沉淀转移至真空干燥箱，60℃真空干燥50小时；所得的牛肺肝素苄基酯称重17.0克，干燥失重为3.9％，酯化度折干后为12.5％；取上述牛肺肝素苄基酯16.0克，溶于400毫升水中，加热至60℃，保温60±1℃30分钟以上，另外准确称取2.0克50％氢氧化钠溶液，加入上述保温的水溶液中，继续搅拌保温60±2℃，反应90分钟，将反应液冷却至室温，加入6.0克30％双氧水，氧化脱色30分钟，用稀盐酸调pH至7.0，0.22微米过滤反应液，滤液加41.0克氯化钠，搅拌确保氯化钠全溶，调pH至6.0，再0.22微米精过滤，加入1000毫升甲醇醇沉，沉淀物经400目过滤，沉淀物再以750毫升甲醇重悬搅拌30分钟，抽滤取沉淀，沉淀溶于40克水后，转移至冻干瓶，真空冻干30小时；冻干粉称重后装袋，密封送检。