[发明专利]一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法

摘要

本发明公开了一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法，采用以芽繁芽的方式，经消毒获得无菌芽后，优化调整培养基的成分及比例，筛选得到初始芽诱导、继代增殖、生根培养等组培繁育阶段的培养基配方，再辅以适宜的温度和光照，建立泡桐优良单株的组培快繁体系。本方法以泡桐优良单株带有腋芽的茎段为外植体，在最大程度上保存了单株的优良特性；在采集外植体前喷施消毒液，有效降低外植体消毒的污染率，污染率最低为2.3%；继代增殖培养基增殖效果显著，增殖系数达13.2～15.8；生根培养周期短，生根培养6～8天开始萌发出根系，生根率达到98.5～100%，继续培养至15天后统计，生根率均可达到100%，具有很好的经济效益、生态效益和社会效益。

主权项

1.一种泡桐优良单株的无性组培快繁方法，其特征在于：包括外植体选择、外植体处理、初始芽诱导培养、增殖培养、壮芽培养和生根培养工序，采集泡桐优良单株当年生的半木质化枝条，在采集前一天，用消毒液对待采集的枝条进行喷雾消毒，对枝条进行修剪成茎段作为外植体，对外植体灭菌消毒处理后接种于初始芽诱导培养基中获取初始芽，再将初始芽接种于增殖培养基中经过10～15d增殖培养，形成丛芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，最后将长≥5cm的单芽的上部剪下后插入生根培养基中诱导生根；主要操作步骤如下：(1)外植体选择：采集泡桐优良单株当年生的半木质化枝条，在采集前一天，用消毒液对待采集的枝条进行喷雾消毒；将采集到的枝条裁剪为长5.0～6.0cm、带有腋芽的茎段作为外植体；(2)外植体处理：用流水洗去外植体表面污垢，再用软毛刷沾取家用洗衣粉轻轻刷洗，置于流水下冲洗10min后，用体积浓度为75％酒精对洗净的外植体浸泡消毒30～60s，浸泡期间按常规方法定时搅拌；然后用无菌水冲洗外植体3～4次，放置于无菌容器中，转入超净台中后，用体积浓度0.1％氯化汞对外植体浸泡消毒6～8min，期间按常规方法定时搅拌；最后用无菌水冲洗外植体3～4次，并用剪刀剪掉切口0.5cm处茎段，余下部分外植体，备用；(3)初始芽诱导培养：将步骤(2)处理后的外植体以直插式接种到初始芽诱导培养基上进行诱导培养；初始芽诱导培养条件为：温度25±2℃～28±2℃，光照500～1000lx，光照8～12h/d；接种后跟踪观察，去除被污染的茎段；接种4～6d后，初始芽萌发、生长；(4)增殖培养：将长2～3cm的初始芽接入增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养条件为：温度28±2℃～30±2℃，光照1000～2000lx，光照10～12h/d；经10～15d培养后行成丛芽；(5)壮芽培养：将步骤(4)得到的芽高为1.8～2.2cm丛生芽进行切割分从，1颗芽/丛，插入壮芽培养基中培养，壮芽培养条件为：温度28±2℃～30±2℃，光照2000～5000lx，光照12～16h/d；培养10～15天后形成壮芽；(6)生根培养：将步骤(5)得到的长≥5cm的单芽取上部3.0～4.0cm剪下，转入生根培育基中，生根培养条件为：温度28±2℃～30±2℃，光照1500～3000lx，光照12～16h/d；余下的单芽下部和从芽基部分别接种至步骤(4)的增殖培养基中继续增殖，然后再重复步骤(5)，循环往复，获得大量壮芽；所述的初始芽诱导培养基的配方为：3/5～5/5改良WPM培养基+6‑BA 1.0～2.0mg/L+NAA 0.1～0.5mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L；所述的增殖培养基配方为：3/5～5/5改良WPM培养基+6‑BA 6.0～8.0mg/L+NAA 0.5～1.5mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L；所述的壮芽培养基配方为：3/5～5/5改良WPM培养基+6‑BA 2.0～5.0mg/L+NAA 1.0～2.5mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂6.0g/L；所述的生根培养基配方为：1/5～3/5改良WPM培养基+ABT 1#1.0～3.5mg/L+NAA 0.5～2.0mg/L+蔗糖15.0g/L+琼脂6.0g/L；步骤(1)所述的消毒液为体积浓度2～5％的苯扎氯铵溶液；所述的改良WPM培养基组分和体积重量比为：NH4NO3 550mg/L，CaCl2·2H2O 192mg/L，MgSO4·7H20 370mg/L，KH2PO4 170mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 180mg/L，KI 0.83mg/L，H3BO36.2mg/L，MnSO4·H2O 22.4mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，CuSO4·5H2O 0.25mg/L，Na2·EDTA 37.3mg/L，FeSO4·7H2O 27.8mg/L，肌醇100mg/L，烟酸1.0mg/L，盐酸吡哆醇1.0mg/L，盐酸硫胺素2.0mg/L，甘氨酸2.0mg/L。