[发明专利]一种快速检测芸薹属六倍体新种质倍性的方法有效
| 申请号： | 201610648697.2 | 申请日： | 2016-08-10 |
| 公开（公告）号： | CN106226137B | 公开（公告）日： | 2019-04-23 |
| 发明（设计）人： | 杨素;周伟军;张康妮;许玲;王尖;葛常青;徐建祥 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | G01N1/28 | 分类号： | G01N1/28;G01N15/14 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡红娟 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种快速检测芸薹属六倍体新种质倍性的方法，包括：(1)从芸薹属新种质上取从心叶往外的第三片叶，装入含有钢珠的离心管中，向离心管中加入提取缓冲液，在‑20～‑10℃下静置5～20min后放入磨样机中进行磨样；(2)将磨碎后的叶片用滤网过滤得滤液，在滤液中加入RNAse溶液，在37℃中孵化20～30min；(3)在孵化后的滤液中加入染色液避光染色得单细胞悬浮液样品；(4)用流式细胞仪对单细胞悬浮液样品进行检测。本发明采用磨样机对叶片组织进行研磨，产生的单细胞悬浮液中单细胞数量较多，很少产生破碎细胞，同时检测效率高，适合大批量检测。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 快速 检测 芸薹属六倍体新 种质 方法 | ||
【主权项】：
1.一种快速检测芸薹属六倍体新种质倍性的方法，其特征在于，包括：（1）在芸薹属新种质四至六叶期时，从芸薹属新种质上取从心叶往外的第三片叶，装入含有钢珠的离心管中，向离心管中加入提取缓冲液，在‑20~‑10℃下静置5~10min后放入磨样机中进行磨样；磨样时，磨样机的振动频率为20~30Hz，磨样机正转12s~2min，反转12s~2min；（2）将磨碎后的叶片用滤网过滤得滤液，在滤液中加入RNAse溶液，在37 ℃中孵化20~30 min；RNAse溶液的浓度为3mg/mL；（3）在孵化后的滤液中加入染色液避光染色得单细胞悬浮液样品；（4）用流式细胞仪对单细胞悬浮液样品进行检测。
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