[发明专利]一种以黄梁木叶片为外植体的高效再生方法

摘要

本发明公开一种以黄梁木叶片为外植体的高效再生方法，属于植物组织培养技术领域。本发明以叶片作为外植体有其巨大的优势，取材方便、操作容易、来源广泛，有利于再生及遗传转化的重复进行等。因此，本发明以黄梁木无菌苗嫩叶为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了黄梁木离体再生植株，建立黄梁木高效再生体系，对于进行黄梁木优良品种的快速繁殖和大面积推广、促进黄梁木的产业化发展具有重要意义，并且为黄梁木遗传转化体系的构建奠定了基础，从而为在黄梁木中进行基因功能等分子生物学研究提供平台。

主权项

1.一种以黄梁木叶片为外植体的再生方法，其特征在于包括如下步骤：(1)不定芽的诱导：选取继代无菌苗的嫩叶为外植体，除去边缘并横向切2～3刀增加伤口；接种到诱导培养基上，于25～28℃条件下全暗培养3～4天，再转移至光照强度为1500～2500lx，光照时间12～15小时，培养温度为25～28℃的条件下培养，直至诱导形成不定芽；(2)继代培养：将步骤(1)获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照13～15小时，光照强度为2000～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养；(3)生根培养：将步骤(2)继代培养长至2～4cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～5天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为1500～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；步骤(1)中所述的诱导培养基为：MS+0.1～0.3mg/L TDZ+0.5～1.5mg/L 2,4‑D+1.0～3.0mg/L IBA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；步骤(2)中所述的增殖培养基为：MS+2.0～4.0mg/L 6‑BA+0.5～2.0mg/L NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；步骤(3)中所述的生根培养基为：1/2MS+0.5～1.5mg/L IBA+0.5～1.5mg/L GGR+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。