[发明专利]一次完全提取小麦麦谷蛋白亚基的新方法

摘要

本发明公开了一次完全提取小麦麦谷蛋白亚基的新方法，经过预处理、去除单体蛋白、提取、分离、电泳等步骤，本方法能够将全麦粉中的高分子量麦谷蛋白亚基与低分子量麦谷蛋白亚基一次完全提取，不仅提高了麦谷蛋白亚基的提取率，也能提高麦谷蛋白亚基的提取工作效率，对于由麦谷蛋白亚基评价小麦的品质提供了依据，本方法在提取前对全麦粉进行去除单体蛋白，能够降低单体蛋白对麦谷蛋白亚基产生的影响，便于提高麦谷蛋白亚基后序的分离分析工作，提高了工效。

主权项

 一次完全提取小麦麦谷蛋白亚基的新方法，其特征在于，采用以下步骤：①预处理：在20℃环境中，称取10mg的全麦粉放入1.5mL的离心管中，加入1.6mL浓度为5%的疏基乙醇，之后采用58KHz的超声波清洗机超声原料，超声原料重复5次，每次持续6s；②去除单体蛋白：将超声波处理后的原料迅速放入转速为16000r/min的离心机中进行离心，离心3min后去除上清液，向去除上清液的离心管内加入1.4mL的6%的丙酮溶液，并搅起沉淀使之充分悬浮，之后采用64KHz的超声波清洗机超声原料，重复4次，每次持续5s，超声处理后静置8min，静置后再进行离心处理，离心转速为13000r/min，时间控制为7min，离心后去除上清液，得原料沉淀；③提取：向沉淀中加入200μL的25%异丙醇、7μL的２－巯基乙醇、10μL的8%的二硫苏糖醇、14μL的4‑乙烯基吡啶，搅动沉淀使之充分悬浮，采用68KHz的超声波清洗机超声原料，重复4次，每次持续12s，在21℃条件下提取13h；④分离：将提取后的原料沉淀迅速放入转速为12000r/min的离心机中进行离心，离心6min后将上清液移入另一个1.5mL离心管中，并向装有上清液的离心管中加入160μL由5%的疏基乙醇、0.09M Tris‑HCL、20%的甘油、7%的2‑氨基‑羟甲基‑1,3‑丙二醇、8%二硫苏糖醇、3%的十二烷基硫酸钠、0.01%溴酚蓝的混合而成的缓冲液，并将缓冲液的pH值设置为6.7，搅拌均匀后加入8μL的4‑乙烯吡啶，搅拌均匀后在65℃的水浴中加热30min，制得提取液；⑤电泳：将提取液进行SDS‑PAGE电泳，浓缩胶质量比浓度为4%，分离胶质量比浓度为10%，点样30μL，电泳系统置于恒温4℃环境中，15mA恒流9h，之后固定2h，染色20h，脱色30h，提取出小麦麦谷蛋白亚基。