[发明专利]多重靶向修饰的载基因复合物及制备方法及应用

摘要

本发明公开了多重靶向修饰的载基因复合物及制备方法及应用，其方法为：制备膜靶向肽修饰的聚阳离子基因载体(I)；将TAT‑NLS多肽水溶液与核酸水溶液混匀；得混合液；将基因载体(I)配成悬浮液；(4)悬浮液和混合液混匀，静置，得到多重靶向修饰的载基因复合物；本发明的多重靶向修饰的载基因复合物。通过膜靶向肽中的REDV肽与内皮细胞表面的整合素受体特异性识别，提高细胞对其摄取。进入细胞后的复合物位于溶酶体/内涵体结构中，通过聚乙烯亚胺与TAT共同作用，提高该复合物的内涵体逃逸能力，促进目的基因进入细胞质中。通过核定位信号NLS与核膜的相互作用，促进目的基因的核内在化。目的基因在内皮细胞中的转染效率强。

主权项

1.多重靶向修饰的载基因复合物的制备方法，其特征是包括如下步骤：/n(1)在氮气保护下，将重均分子量为26000-30000的聚乙烯亚胺-聚(乙交酯-co-己内酯)-聚乙烯亚胺共聚物、重均分子量为2000-7500的两端分别为邻二硫吡啶基和琥珀酰亚胺酯基修饰的聚乙二醇，在混合溶剂中溶解，在室温、避光条件下反应2-4h，加入膜靶向肽，反应4-8h，产物在蒸馏水中透析48-72h，冷冻干燥，得到膜靶向肽修饰的聚阳离子基因载体(I)；/n所述聚乙烯亚胺-聚(乙交酯-co-己内酯)-聚乙烯亚胺共聚物中的所接枝的支化聚乙烯亚胺的重均分子量相同，且为10000；/n所述混合溶剂由体积比为1：(2-4)的pH为8.0-9.0的0.1mol/L磷酸缓冲溶液和二甲基亚砜组成；/n所述聚乙烯亚胺-聚(乙交酯-co-己内酯)-聚乙烯亚胺共聚物、所述的两端分别为邻二硫吡啶基和琥珀酰亚胺酯基修饰的聚乙二醇以及膜靶向肽的摩尔比为1：(1-20)：(0.5-20)；/n所述膜靶向肽为Cys-X-Arg-Glu-Asp-Val-Trp，所述X为0-5个Gly、或0-5个Ala、或0-5个Gly和Ala的任意组合；/n(2)室温下，按简写为TAT-NLS多肽与核酸的质量比为(0.5-1.2)：1的比例，将TAT-NLS多肽水溶液与核酸水溶液混合均匀，静置20-40分钟；得到混合液；/n(3)将所述基因载体(I)配成浓度为0.1-0.8mg/mL的基因载体(I)纳米粒悬浮液；/n(4)将所述基因载体(I)纳米粒悬浮液和步骤(2)获得的混合液混合均匀，静置20-40分钟，得到多重靶向修饰的载基因复合物；所述基因载体(I)的聚乙烯亚胺-聚(乙交酯-co-己内酯)-聚乙烯亚胺共聚物中的氮与混合液中核酸的磷的摩尔比为10-30：1。/n