[发明专利]一种快速测定食品中L‑谷氨酸的方法

摘要

本发明涉及一种快速测定食品中L‑谷氨酸的方法，包括以下步骤：将固体或半固体样品用合适的工具碾碎或绞烂，称取适量已碾碎或绞烂的样品，加入合适的溶剂进行均质、离心分离、过滤，得到游离L‑谷氨酸提取液，或通过蛋白水解得到构成蛋白质结构的L‑谷氨酸提取液(液体样品无需上述前处理，直接过滤即可)；将样品提取液经适当稀释并调pH至8.6；样品检测液的L‑谷氨酸在谷氨酸脱氢酶(GIDH)存在的条件下将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)还原成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)，NADH在心肌黄酶的作用下与碘四唑硝基氯(INT)反应生成甲瓒；采用光吸收酶标仪在490nm处测定甲瓒的吸收峰，利用外标法，根据甲瓒吸光值计算样品中L‑谷氨酸含量。本发明所述检测方法具有操作简便、准确性好、快速、高通量、易于推广等特点。

主权项

一种快速测定食品中L‑谷氨酸的方法，其特征在于：包括以下步骤，(1)对样品进行前处理，提取样品中的L‑谷氨酸，离心过滤；(2)取适量滤液，调pH至8.0～9.0，并稀释至一定体积，作为样品检测液，样品检测液L‑谷氨酸浓度控制在0.006g/L～0.06g/L范围内；(3)设置光吸收酶标仪检测参数：检测波长为490nm，读板方式为按排逐孔检测，读数时间为0.5秒/孔；(4)分别吸取50μL的L‑谷氨酸标准系列溶液、样品检测液、水到透明96孔板相应检测孔中；(5)往每个相应检测孔加入100μL检测试剂A，混匀，采用光吸收酶标仪进行第一次吸光值测定；所述检测试剂A的成分为试剂A1、A2、A3的混合物，试剂A1：三乙醇胺磷酸盐缓冲液、曲拉通；试剂A2：心肌黄酶、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)；试剂A3：碘四唑硝基氯(INT)；(6)往每个相应检测孔加入50μL检测试剂B，混匀，反应10～20分钟后，采用光吸收酶标仪进行第二次吸光值测定；所述检测试剂B的组分为谷氨酸脱氢酶(GLDH)；(7)根据前后两次测定的吸光值差，建立L‑谷氨酸标准曲线，将样品检测液吸光值差代入L‑谷氨酸标准曲线的线性回归方程，求得样品检测液L‑谷氨酸浓度，乘以相应稀释倍数，即为样品L‑谷氨酸含量。