[发明专利]一种固定化蜗牛酶制备烟草浸膏的方法

摘要

本发明公开了一种固定化蜗牛酶制备烟草浸膏的方法，属于烟草浸膏制备技术领域。本发明从蜗牛消化腺中提取蜗牛酶配制缓冲液，向里加入磁流体悬浮液，辅以海藻酸钠固定，制得固定化蜗牛酶，用其酶解烟叶并辅以桂花精油来提高浸膏细腻度，制得烟草浸膏。本发明利用蜗牛酶中富含的各种活性酶来酶解烟叶，高效实用，再用磁性粒子固定，解决了传统酶法制备浸膏，蛋白质易残留的问题，辅以桂花精油的表面活性功能，又弥补了传统酶法制备的浸膏刺激性增加、柔和细腻度差的缺陷，可广泛推广使用。

主权项

一种固定化蜗牛酶制备烟草浸膏的方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）挑选20～30只体长7～8cm的非洲大蜗牛放于不锈钢筛网中，每天用流动去离子水冲洗3～5h，并饥饿处理5～7天以吐出体内杂物，吐杂结束后人工剖出蜗牛消化腺，吸取消化液转存于烧杯中，立即将所得消化液放入卧式离心机，在4～6℃下以10000～12000r/min转速离心分离10～15min，得上层澄清蜗牛酶液，备用；（2）按摩尔比2:1，将质量浓度为0.3mol/L硫酸亚铁和质量浓度0.2mol/L氯化铁溶液混合后，用质量浓度为3mol/L氢氧化钠溶液调节pH至8.5～9.5，在70～80℃水浴条件下搅拌反应30～40min，得磁流体悬浮液；（3）向上述磁流体悬浮液中加入其体积1/5质量浓度为10%海藻酸钠溶液，混合得混合液，将其置于磁力搅拌机上，在搅拌状态下加入混合液总质量3～5%失水山梨醇脂肪酸酯，继续搅拌乳化5～10min后，再加入混合液总质量1～3%戊二醛，在30～40℃下反应3～5h；（4）反应结束后，将反应液倒入等体积的质量浓度为10%氯化钙溶液中，并放入4～6℃冰水浴中静置沉淀过夜，过滤得沉淀物，放入烘箱干燥得磁性海藻酸钠载体，量取300～500mL备用的上层澄清蜗牛酶液溶于其等体积pH为4.6～5.6醋酸‑醋酸钠缓冲液中，加入15～25g磁性海藻酸钠载体，用漩涡振荡仪在30～40℃下以30～50W功率振荡吸附过夜后，过滤并真空冻干后，得固定化蜗牛酶；（5）称取100～200g烟叶放入气流粉碎机粉碎后过100目标准筛，将过筛烟叶碎片按固液比为1:5加入去离子水中，混合后放入铁锅，在95～100℃下蒸煮40～60min，蒸煮结束后冷却至室温，将蒸煮物转入陶瓷发酵罐中，并加入蒸煮物总质量5～8%固定化蜗牛酶和20～30mL桂花精油，在35～45℃下保温酶解2～4h；（6）酶解结束后，过滤得酶解液，并回收固定化蜗牛酶，再向酶解液中加入其体积1～2倍质量浓度为95%乙醇溶液，放入‑30～‑20℃冰箱中，静置沉淀过夜，沉淀完成后，用卧式离心机以3000～4000r/min转速离心分离10～15min，去除滤渣，得滤液；（7）将上述滤液放入真空浓缩罐中，降低罐内压力至900～1000Pa，减压浓缩至原质量1/4，得浓缩液，再转入喷雾干燥机中干燥至其水分含量为3～5%，出料后装罐，即得烟草浸膏。