[发明专利]一种TCR基因修饰的CD8+T记忆性干细胞的制备方法及其用途在审
| 申请号： | 201610482254.0 | 申请日： | 2016-06-27 |
| 公开（公告）号： | CN107541498A | 公开（公告）日： | 2018-01-05 |
| 发明（设计）人： | 吴向华;邢凯琳;胡爱群 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属肿瘤医院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙)31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 200032 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属免疫学及肿瘤治疗学技术领域，涉及一种TCR基因修饰的CD8+T记忆性干细胞的制备方法及其用途；本方法包括将肿瘤抗原与未成熟的树突状细胞共孵育，获得特异性肿瘤抗原负载的成熟树突状细胞后与CD8+初始T细胞共培养，并加入干细胞分化抑制剂促进CD8+干细胞样记忆性T淋巴细胞产生；分离获得CD8+干细胞样记忆性T淋巴细胞；再克隆特异识别特定抗原表位的T细胞受体基因(TCR)，通过慢病毒包装或逆转录病毒载体共转染自体的CD8+Tscm细胞，体外制备不同肿瘤特定抗原特异性的CD8+TCR‑Tscm细胞。该方法制得的CD8+TCR‑Tscm细胞具有克服肿瘤异质性，特异性高，不良反应少的高效持久的防治肿瘤效果。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 tcr 基因 修饰 cd8 记忆 干细胞 制备 方法 及其 用途 | ||
【主权项】：
一种TCR基因修饰的CD8+T记忆性干细胞的体外制备方法，其特征在于，其包括步骤：(1)将合成的肿瘤特异性抗原肽与未成熟的树突状细胞共孵育，获得特异性肿瘤抗原负载的成熟树突状细胞；(2)将步骤(1)获得的成熟树突状细胞与CD8+初始T细胞共培养，并加入干细胞分化抑制剂促进、产生肿瘤抗原特异性的特异肿瘤细胞的CD8+干细胞样记忆性T淋巴细胞；(3)分离获得能特异性识别特异肿瘤细胞的CD8+干细胞样记忆性T淋巴细胞；(4)从分离获得的特异性识别表达特定肿瘤抗原的CD8+干细胞样记忆性T淋巴细胞中克隆特异识别特定抗原表位的T细胞受体(TCR)基因α链和β链；(5)用步骤(4)获得的识别特定抗原表位的TCR基因α链和β链，构建识别不同肿瘤特定抗原的TCR基因，通过慢病毒包装或逆转录病毒载体转染自体的CD8+Tscm细胞，体外制备不同肿瘤特定抗原特异性的CD8+TCR‑Tscm细胞；(6)用CRISPR/Cas9基因敲除步骤(5)制备的抗原特异性的CD8+TCR‑Tscm细胞一个或多个抑制性受体基因。
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