[发明专利]一种抗人CD20单克隆抗体-DM1偶联物及其制备方法

摘要

本发明涉及生物技术技术领域，具体涉及一种抗人CD20抗体‑DM1偶联物及其制备方法，它包括抗人CD20的单克隆抗体、美登素类细胞毒化合物，该单克隆抗体为利妥昔单抗，该美登素类细胞毒化合物为DM1，单克隆抗体与DM1通过双功能团连接子N‑琥珀酸酰亚胺基4‑环己烷羧酸酯相连；抗体偶联的DM1的平均数量，即抗体药物偶联效率为3.0‑4.0；它利用单克隆抗体特异性识别肿瘤细胞上特定抗原的特点，偶联美登素类细胞毒化合物，可实现精准地将抗肿瘤物质递送到肿瘤靶细胞释放，具有制备方法简单，成本低，见效快，药效高等优点。

主权项

一种抗人CD20抗体‑DM1偶联物及其制备方法，其特征在于：它包括抗人CD20的单克隆抗体、美登素类细胞毒化合物，该单克隆抗体为利妥昔单抗，该美登素类细胞毒化合物为DM1，单克隆抗体与DM1通过双功能团连接子N‑琥珀酸酰亚胺基4‑环己烷羧酸酯相连；抗体偶联的DM1的平均数量，即抗体药物偶联效率为3.0‑4.0；其制备方法如下：1)将抗人CD20抗体pH调节至6.0‑7.5；其采用如下步骤:步骤一：直接向抗人CD20抗体中加入磷酸钠缓冲液、磷酸钾缓冲液、碳酸钠缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、3‑(N‑吗啉基)丙磺酸缓冲液，至pH调节为6.0‑7.5；步骤二：使用超滤管将抗体溶液浓缩；步骤三：使用紫外分光光度法测抗体溶液浓度；2)将连接有双功能团连接子的DM1，即DM1‑SMCC化合物溶解于有机溶剂中，浓度为1‑10mg/ml；其制备配制DM1‑SMCC溶液的方法步骤如下：步骤一：称取DM1‑SMCC于玻璃容器中，加入乙醇、异丙醇、N,N‑二甲基甲酰胺、N,N‑二甲基乙酰胺、二甲亚砜，振荡使DM1‑SMCC完全溶解；步骤二：使用紫外分光光度法测所配溶液中DM1‑SMCC浓度；3)将抗体与DM1‑SMCC溶液混合孵育，采用如下的方法步骤：步骤一：将DM1‑MCC溶液滴加至抗人CD20抗体中，搅拌均匀；步骤二：置于4‑25℃的水浴或者空气浴中孵育2‑24小时；步骤三：控制DM1‑SMCC与抗体的摩尔比为5‑12:1；加入缓冲液，使抗体在反应液中的浓度在1‑10mg/ml；4)孵育后的反应液通过一步纯化，得到抗体药物偶联物；其方法步骤如下：将反应液放入用置换缓冲液预先平衡的分子筛旋转层析柱中，使用离心机，以1000转/分钟的转速离心2分钟，所得样品即为纯化后的偶联物；或将反应液放入截留分子量为10kDa、30kDa的透析膜中，封口。将透析膜放入置换缓冲液中，搅拌；24小时后，将置换后的反应液取出，即为纯化后的偶联物；或将反应液放入截留分子量为10kDa、30kDa的超滤管中，以6000转/分钟的转速离心5分钟，然后向超滤管中补加置换缓冲液，再进行离心操作；如此重复5次，取出超滤管中样品，即为纯化后偶联物。