[发明专利]三文鱼中磷脂分子的检测方法

摘要

本发明公开了一种三文鱼中磷脂分子的检测方法，包括以下步骤：1)、样品前处理：将三文鱼肉洗净后研磨成糜，在三文鱼肉糜中加入有机溶剂Ⅰ后震荡混匀；超声冰浴提取，提取完毕后向加入纯水并震荡混匀；所得的混合物用冷冻离心机离心，移取下相溶液，将该下相溶液低温干燥后，用有机溶剂Ⅱ复溶，得脂质粗提物；2)、富集和净化：先对固相萃取柱进行活化处理；然后将脂质粗提物经上样、淋洗、洗脱；所收集的洗脱液为磷脂提取液；3)、将磷脂提取液进行质谱检测分析。采用本发明的方法能实现对三文鱼中磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰乙醇胺(PE)两大类磷脂的结构鉴定和定量分析。

主权项

1.三文鱼中磷脂分子的检测方法，其特征是包括以下步骤：1)、样品前处理：将三文鱼肉洗净后研磨成糜，在三文鱼肉糜中加入有机溶剂Ⅰ后震荡混匀；超声冰浴提取，提取完毕后加入纯水并震荡混匀；所得的混合物用冷冻离心机离心，移取下相溶液，将该下相溶液低温干燥后，用有机溶剂Ⅱ复溶，得脂质粗提物；有机溶剂Ⅰ为甲醇：氯仿＝1：0.5～2体积比的混合液，三文鱼肉糜与有机溶剂Ⅰ的料液比为1g/15～30ml；所加入纯水的量为有机溶剂Ⅰ的0.5～1体积倍；所述有机溶剂Ⅱ为体积浓度≥30％的甲醇水溶液或甲醇；2)、富集和净化：先对固相萃取柱进行活化处理；然后将脂质粗提物经上样、淋洗、洗脱；所收集的洗脱液为磷脂提取液；固相萃取柱填料为二氧化硅/二氧化钛壳核复合材料；淋洗液为10％乙腈；洗脱液为90％乙腈；淋洗和洗脱时的流速均为0.6mL/min，3)、将磷脂提取液进行质谱检测分析；将磷脂提取液与DHB基质等体积比混合后的所得物在点样板上点样，于空气中干燥结晶后进行质谱分析；正离子反射模式，加速电压20kV，离子萃取时间延迟450ns，扫描范围为450～1000m/z；质谱数据采集使用4000Series Explorer，所有谱图均经同位素校正，确保微量磷脂的离子峰不受其他高浓度磷脂离子峰干扰。