[发明专利]一种降低刀额新对虾过敏原原肌球蛋白的方法

摘要

本发明提出一种降低刀额新对虾过敏原原肌球蛋白的方法，包括如下步骤：A，刀额新对虾原肌球蛋白的纯化；B，将步骤A得到的原肌球蛋白用10mM的PBS缓冲液稀释成浓度为1‑4mg/ml的原肌球蛋白；向稀释后的蛋白中加入转谷氨酰胺酶，该酶的添加量为8‑15U/g蛋白；或者向稀释后的蛋白中加入转谷氨酰胺酶和氨基葡萄糖，其中酶的添加量为8‑15U/g蛋白，氨基葡萄糖与蛋白的质量比为1:1；将仅添加转谷氨酰胺酶的蛋白以及添加转谷氨酰胺酶和氨基葡萄糖的蛋白均放置于温度为25‑40℃的恒温培养箱内进行振荡孵育，在4℃下透析24h，得到低敏性原肌球蛋白。本发明能有效降低虾类食品中主要过敏原原肌球蛋白的活性。

主权项

1.一种降低刀额新对虾过敏原原肌球蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：A，刀额新对虾原肌球蛋白的纯化；(1)将新鲜的刀额新对虾去头，去壳，去肠线，蒸馏水洗净后称重，得虾肉；(2)取虾肉与肌原纤维提取液混合匀浆，其中虾肉与肌原纤维提取液的质量体积比为1：1，将混合物离心，4000r/min，15min，取沉淀，重复5次；(3)将经步骤(2)得到的沉淀置于95％冷乙醇中反复抽提三次，其中，沉淀与冷乙醇的质量体积比为1：2，4000r/min离心15min，再得沉淀；再将沉淀置于乙醚中反复抽提三次，该沉淀与冷乙醇的质量体积比为1：2，4000r/min离心15min，再得沉淀；于通风橱中将沉淀过夜风干；(4)将经步骤(3)得到的沉淀浸于原肌球蛋白抽提液中，沉淀与原肌球蛋白抽提液的质量体积比为1：10，匀浆，在4℃冰箱中抽提24h后，6000r/min离心30min，取上清液；(5)将上清液用30％的硫酸铵沉淀后，3000r/min离心20min，并将离心后的沉淀用30％硫酸铵溶液再清洗2次后，3000r/min离心20min，取沉淀溶解在10mM的PBS缓冲液中，得蛋白溶液；(6)将蛋白溶液置于透析袋中，于10mM的PBS缓冲液中透析24h；(7)透析结束后，将蛋白溶液置于沸水浴中加热10min，快速冷却至室温后，9000r/min离心30min，除去沉淀的变性蛋白，上清液即得纯化后的虾原肌球蛋白；B，将步骤A得到的原肌球蛋白用10mM的PBS缓冲液稀释成浓度为1‑4mg/ml的原肌球蛋白；向稀释后的蛋白中加入转谷氨酰胺酶，该酶的添加量为8‑15U/g蛋白；或者向稀释后的蛋白中加入转谷氨酰胺酶和氨基葡萄糖，其中酶的添加量为8‑15U/g蛋白，氨基葡萄糖与蛋白的质量比为1:1；将仅添加转谷氨酰胺酶的蛋白以及添加转谷氨酰胺酶和氨基葡萄糖的蛋白均放置于温度为25‑40℃的恒温培养箱内进行振荡孵育，转速为150‑200rpm，反应时间为5‑8h，反应完成将其进行冷却后，在4℃下透析24h，以除去未发生反应的游离氨基葡萄糖，得到透析液为低敏性原肌球蛋白；所述肌原纤维提取液配方：称取1.49gKCl，0.1gKHCO₃，0.0154gDTT，加超纯水定容至1000mL，4℃保存；所述原肌球蛋白抽提液配方：74.5gKCl，0.5gNaN₃，加超纯水定容至1000mL，并将其pH调为7.5，4℃保存。