[发明专利]一种天然组织来源的肌腱联合骨脱细胞材料的制备方法

摘要

本发明公开了一种天然组织来源的肌腱联合骨脱细胞材料的制备方法，本发明将哺乳动物任意大小的跟腱联合骨组织经含蛋白酶抑制剂的生理盐水、含蛋白酶抑制剂的PBS、含Triton X的PBS缓冲液、含SDS的PBS缓冲液、含DNA酶的PBS缓冲液处理，获得肌腱联合骨脱细胞材料。本发明能同时对肌腱联合骨组织上的肌腱细胞和骨细胞以及交界面上的软骨细胞进行完全去细胞化处理，且条件温和、无ECM损害、快速稳定，所得肌腱联合骨材料具有生物相容性好、可塑性强、生物力学强度高等优点，可用于修复临床上各类病因造成的肌腱退行性疾病，肌腱严重撕裂和肌腱联合骨再生、修复障碍。

主权项

1.一种天然组织来源的肌腱联合骨脱细胞材料的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤(1)取宰杀12h以内任意哺乳动物的跟腱连跟骨，用剪刀除去跟腱上的脂肪，用含蛋白酶抑制剂的生理盐水漂洗3次，每次20min，去除血液，贴附的脂肪碎片和其他杂质；步骤(2)在含蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液中，低温摇床150rpm震荡24‑48小时，温度为4℃；步骤(3)在含Triton X的PBS缓冲液中，加入混合抗菌液，低温摇床150rpm震荡24‑48小时，温度为4℃；步骤(4)在含SDS的PBS缓冲液中，低温摇床150rpm震荡24‑72小时，温度为4℃；步骤(5)在含Triton X的PBS缓冲液中，加入混合抗菌液，低温摇床150rpm震荡7‑16天，温度为4℃；步骤(6)在含SDS的PBS缓冲液中，低温摇床150rpm震荡2‑20天，温度为4℃；步骤(7)在含DNA酶的PBS缓冲液中，加入青霉素和链霉素混合抗菌液，37℃摇床150rpm震荡12小时；步骤(2)‑(6)中，每个步骤完成后均用生理盐水冲洗5小时；含蛋白酶抑制剂的生理盐水，其中蛋白酶抑制剂浓度为10‑50KIU/ml；含蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液，其中蛋白酶抑制剂浓度为10‑50KIU/ml；含Triton X的PBS缓冲液，体积浓度为1％‑12％的Triton X‑200或Triton X‑100的PBS缓冲液；含SDS的PBS缓冲液，体积浓度为0.5％‑8％的SDS的PBS缓冲液；含DNA酶的PBS缓冲液中DNA酶浓度为0.5‑2mg/ml；混合抗菌液中青霉素和链霉素的浓度都为20KIU/ml，青霉素和链霉素的比例为1:1；加入的混合抗菌液与原溶液体积比为1:1；步骤(4)中的含SDS的PBS缓冲液的浓度低于步骤(6)中含SDS的PBS缓冲液的；步骤(3)中的在含Triton X的PBS缓冲液浓度低于步骤(5)含Triton X的PBS缓冲液。