[发明专利]产红景天苷及其类似物的重组菌、构建方法及用途

摘要

本发明公开了一种产红景天苷及其类似物的重组菌、构建方法及用途，构建方法为：人工全合成酮基脱羧酶基因synkdc和糖基转移酶基因synyjic，将synkdc基因通过酶切，连接到表达载体pRSFDuet‑1的第一个启动子下游，筛选阳性克隆得到重组载体pSynkdc1；将synyjic基因连接到pSynkdc1的第二个启动子下游，筛选阳性克隆得到重组载体pSynkdc1‑yjic，并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，得到重组菌；该重组菌以酪氨酸或葡萄糖为碳源，利用游离诱导表达和整合表达两种方法进行发酵生产红景天苷及其类似物。本发明可解决红景天苷及其类似物的来源问题，降低了成本，有利于工业化生产。

主权项

一种产红景天苷及其类似物的重组菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：(1)人工全合成酮基脱羧酶基因synkdc，所述酮基脱羧酶基因synkdc的核苷酸序列如SEQ ID No.03所示；人工全合成糖基转移酶基因synyjic，所述糖基转移酶基因synyjic的核苷酸序列如SEQ ID No.04所示；(2)按下述三种方式之一种进行：方式一：①将synkdc基因通过酶切，连接到表达载体pRSFDuet‑1的第一个启动子下游，筛选阳性克隆得到重组载体pSynkdc1；②将synyjic基因连接到pSynkdc1的第二个启动子下游，筛选阳性克隆得到重组载体pSynkdc1‑yjic；③将重组载体pSynkdc1‑yjic转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，得到SyBE‑218001菌株；方式二：①将synkdc基因通过酶切，连接到表达载体pCDFDuet‑1的第一个启动子下游，筛选阳性克隆得到重组载体pSynkdc2；②将synyjic基因连接到pSynkdc2的第二个启动子下游，筛选阳性克隆得到重组载体pSynkdc2‑yjic；③将重组载体pSynkdc2‑yjic转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，得到SyBE‑218002菌株；方式三：①将synkdc基因，通过λRed同源重组技术整合到大肠杆菌BL21(DE3)中，同时敲除基因feaB，得到SyBE‑218003菌株；②将synyjic基因，通过λRed同源重组技术整合到大肠杆菌SyBE‑218003菌株中，同时敲除基因ushA，得到SyBE‑218004菌株。