[发明专利]一种以菌糠提取液为原料制备金针菇液体菌种的方法

摘要

本发明公开了一种以菌糠提取液为原料制备金针菇液体菌种的方法，包括以下步骤：制备菌糠提取液、配制摇瓶培养基、接种、菌球形态及菌丝含量测定、酶活力测试、发酵罐扩培、制作栽培瓶；其中，摇瓶培养基的配方为：一级白砂糖36g、140目豆粕粉5.8g、KH₂PO₄分析纯1.24g、MgSO₄·7H₂O分析纯1.28g、菌糠提取液2000mL。本发明以金针菇采收之后剩余的菌糠为原料制备了金针菇液体菌种，通过本发明制备的液体菌种具有菌丝活力强、浓密，生物转化率高、生产周期短的优点，不仅有效提高了企业的经济利润，而且减轻了菌糠肆意堆积造成的资源浪费及环境污染问题。

主权项

一种以菌糠提取液为原料制备金针菇液体菌种的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：A、制备菌糠提取液：富集金针菇采收之后剩余的菌糠，按照料水比1：25进行配制，配制完成后室温下静止24h，然后用八层纱布或过滤装置过滤，过滤后的滤液即为菌糠提取液；B、配制摇瓶培养基：摇瓶培养基的配方为：一级白砂糖36g、         140目豆粕粉5.8g、KH₂PO₄分析纯1.24g、      MgSO₄·7H₂O分析纯1.28g、菌糠提取液2000mL；调pH至6.0～6.9后，将上述培养基分装至含转子的三角烧瓶中；用棉塞塞紧三角烧瓶瓶口，并用铝箔纸包紧瓶口，121℃下高压灭菌30～60min；灭菌结束后，冷却至室温；C、接种：在无菌环境下，用接种环钩取金针菇母种菌块8～10块，转接到冷却后的摇瓶培养基中，20～25℃条件下摇瓶培养7天，摇床转速150r/min；D、菌球形态及菌丝含量测定：摇瓶培养结束后，首先观察培养瓶内菌球形态及液体澄清度，然后用pH计测试菌液的pH，判断菌种的生长状况；再随机抽取三个摇瓶菌种，放在磁力搅拌器上将菌种搅碎，用注射器吸取10g菌液于已知质量的离心管中，配平后离心弃上清液，通过称量沉淀和离心管的质量，计算出菌丝的平均含量，并与常规方法制备的菌种菌丝含量相对比；E、酶活力测试：随机抽取九个摇瓶菌种，平均分成三组；首先制备粗酶液并绘制葡萄糖标准曲线；将三组摇瓶菌种在磁力搅拌器上搅拌破碎，分别取5mL破碎后的菌液于10mL离心管内,3500r/min离心10min,取上清液做为粗酶液；得到的三组粗酶液分别进行羧甲基纤维素酶酶活、半纤维素酶酶活、漆酶酶活的测试，并与常规方法制备的粗酶液酶活进行对比；F、发酵罐扩培：按照以下配方进行发酵培养基的配制：一级白砂糖12595g、     140目豆粕粉2025g、KH₂PO₄分析纯429g、      MgSO₄·7H₂O分析纯443g、菌糠提取液700L；调pH至6.0～6.9后高压灭菌；将发酵罐内的发酵培养基冷却至室温，接种步骤C中摇瓶培养结束后的菌液；20～25℃条件下发酵培养7天，通气量0.1MP；G、制作栽培瓶：称取玉米芯、米糠、麸皮、棉籽壳、大豆皮、啤酒糟、甜菜渣，将上述原材料搅拌混合25min，然后边加菌糠提取液边继续搅拌40～50min，调制成含水量为65％±1、pH为6.3～6.9的混合材料；在栽培瓶中种入上述混合材料，使每瓶标重为1020±20g；采用五孔打眼法，使料面平整距离栽培瓶瓶口2.0cm，121℃高压灭菌80～100min，冷却至室温，最后接种步骤F扩培后的发酵液菌种。