[发明专利]一种高效扩增冷冻保存NK细胞的方法及其应用有效
| 申请号： | 201610340117.3 | 申请日： | 2016-05-20 |
| 公开（公告）号： | CN105838677B | 公开（公告）日： | 2019-07-02 |
| 发明（设计）人： | 卓朗;王晖;王柯 | 申请（专利权）人： | 杭州优善生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N5/0783;C12N13/00;A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京天昊联合知识产权代理有限公司 11112 | 代理人： | 王静;丁业平 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市滨江区*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明属于细胞工程领域，具体涉及一种高效扩增冷冻保存NK细胞的方法及其应用。所述方法通过将融合基因通过质粒进行基因重组至AAVS1转座子，并在细胞扩增中间阶段引入冷冻/融化步骤至修饰K562细胞系为基础的NK细胞扩增步骤；最后进行NK细胞的扩增和保存。通过使用位点特异性基因的整合技术开发的K562‑mbIL15‑41BBL‑mbIL21细胞系，通过具有高的NK细胞活性，纯度和细胞毒性，实现高NK细胞扩增效率以提高NK扩增；具有极大的市场前景和经济价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高效 扩增 冷冻 保存 nk 细胞 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种扩增经冷冻保存的NK细胞的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：1)将融合基因通过质粒进行基因重组至K562细胞的AAVS1转座子，得到修饰的K562细胞，所述融合基因为mbIL15，4‑1BBL和mbIL21；2)将PBMC与经γ照射的所述修饰的K562细胞进行共培养，并且在共培养过程中加入IL‑2，从而进行NK细胞的扩增；3)冷冻保存步骤2)扩增得到的NK细胞，得到经冷冻保存的NK细胞；4)解冻所述经冷冻保存的NK细胞，将该解冻的NK细胞与经γ照射的所述修饰的K562细胞进行共培养。
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