[发明专利]一种创制芜菁和萝卜属间杂种的方法

摘要

本发明涉及一种创制芜菁和萝卜属间杂种的方法，属于生物技术育种技术领域。该具体包括如下步骤亲本材料的播种；花期杂交授粉；考种；组织培养获得杂种苗；无菌苗驯化；杂种形态学鉴定；杂种的细胞学鉴定方法。本发明根据芸薹属和萝卜远缘杂交，芸薹属的雌蕊允许萝卜花粉萌发和花粉管伸长，但是受精后障碍严重的特点，采用蕾期授粉以及授粉前涂抹一定浓度赤霉素到母本柱头上的方法，最大程度改善属间杂交的亲和性，授粉后，采取的是自然结荚，借助组织培养技术，进行种粒无菌培养的方法，获得了杂种苗并对其进行了形态学和细胞学的鉴定，确定是真实的属间杂种。

主权项

一种创制芜菁和萝卜属间杂种的方法，具体包括如下步骤：(1)亲本材料的播种：为使花期相遇，在塑料大棚中，于10月份播种萝卜材料，11月份播种芜菁材料；(2)花期杂交授粉：次年3‑4月份，以芜菁为母本，以萝卜为父本，采用人工去雄、蕾期采用化学药剂涂抹柱头的方式进行授粉杂交；具体如下：(A)对母本花序进行整理，去除已经开放的花以及花序中间特别小的花蕾，保留花序外围，未开放的大花蕾，进行剥蕾、去雄；(B)使用质量浓度为60mg/L的GA3对授粉前母本柱头进行滴浸；(C)取父本植株上，新开放的新鲜花粉，涂抹柱头，授粉后套袋，并挂牌标记杂交组合、授粉时间；(3)考种：6月中旬，种荚成熟后，陆续采收、脱荚，统计收获种子数量和编号；(4)组织培养获得杂种苗：9月中旬，利用组织培养技术对收获的种子，进行发芽、生长；具体如下：(A)种子首先进行70％乙醇处理1min；(B)6％次氯酸钠溶液处理15min；(C)无菌水冲洗4～5次；(D)无菌滤纸吸干种子上残存水分；(E)接种于1/2MS培养基上，每瓶接种10～15粒种子；(F)放置在组织培养室内进行培养，培养条件为：室温25℃，光照时间为16h/d，光照强度为2000lux条件下培养，获得无菌苗；(5)无菌苗驯化；待无菌苗生长至根系健壮后，于驯化前一天，揭开瓶盖进行练苗，移栽至盛装灭菌营养土的小钵中，遮阳网遮盖，进行幼苗生长，一周后，移栽入塑料大棚中，进行常规管理；(6)杂种形态学鉴定：采用形态学的方法，对杂种苗进行鉴定，利用米尺、直尺以及游标卡尺，分别统计其株高、叶形、叶片大小、花色、花蕾大小、花萼大小、花瓣大小、雄蕊长、雌蕊长，花粉情况，每次测量重复3次；(7)杂种的细胞学鉴定方法：取花蕾，利用细胞学方法，进行染色体鉴定。