[发明专利]一种两性亲水富集糖基化肽段并质谱分析的方法

摘要

一种两性亲水富集糖基化肽段并质谱分析的方法。本发明属蛋白质分析领域，具体为一种糖基化肽段两性亲水富集并质谱分析的方法，其包括：首先对树枝状聚合物PAMAM进行磺酸化衍生反应使得末端氨基变为磺酸基，再利用碘甲烷将产物的骨架氮转为季铵基团，合成两性亲水的树枝状聚合物。利用该材料高效特异结合血清样品酶解物中的糖基化肽段，通过超滤辅助技术将未和纳米材料反应的非糖肽清洗除去,最后再利用去糖链酶将捕获的糖肽从材料上解离下来，送入液相色谱‑质谱分析糖基化肽。本发明方法步骤简单、操作方便、快速高效，可以实现糖基化肽的高特异性、高灵敏、高选择性质谱分析。

主权项

1.一种利用两性亲水材料富集糖肽并对糖肽进行质谱分析的方法，其特征在于用末端磺酸化修饰和骨架氮的季铵化修饰的树枝状聚合物分子材料PAMAM作为吸附剂，利用材料上的磺酸基团与糖链的亲水相互作用和带正电的季铵基团与糖链间弱静电相互作用，将糖肽结合在树枝状聚合物分子材料PAMAM上，经超滤的手段使得糖肽与未结合的非糖肽溶液分离，最终实现糖肽的选择性富集和质谱分析；具体步骤如下：（1）将末端磺酸化修饰和骨架氮的季铵化修饰的树枝状聚合物分子材料PAMAM与多肽溶液充分混合，将得到的混合溶液在室温条件下孵育；所述多肽溶液的溶剂为含体积比70~85%乙腈、0.1~0.2%三氟乙酸的水溶液；（2）将混合溶液倒入超滤管并进行离心超滤分离，使混合溶液中非糖肽和糖肽分离，分别位于超滤管的下部和上部，收集超滤管上部的含糖肽溶液；（3）用清洗缓冲液清洗步骤（2）中分离后余留的结合着糖肽的树枝状聚合物分子材料PAMAM，清洗后继续重复步骤（2）若干次，收集上部的含糖肽溶液；所述清洗缓冲液为含70~85%乙腈、0.5~0.6%三氟乙酸的水溶液；（4）清洗结束后，在所得的含糖肽溶液中加入洗脱缓冲液，离心超滤分离，使该溶液中糖肽与聚合物分子材料分离，分别位于超滤管的下部和上部，收集超滤管下部的糖肽溶液并进行冷冻干燥；所述洗脱缓冲液为含1~1.5%三氟乙酸的水溶液；（5）将经冷冻干燥后的糖肽，用碳酸氢铵缓冲液重溶，加入糖甘酶PNGase F充分混合；取上清液与有机基质混合，进行基质辅助激光解吸离子化质谱分析。