[发明专利]一种利用肠壁优势菌替代天然菌群的制备方法及其应用

摘要

一种利用肠壁优势菌替代天然菌群的制备方法及其应用，是采用肠镜活体收集健康人和肠道疾病患者肠道粘膜样品，之后于样品保存于‑80℃冰箱。再将经过严格筛选的健康人粪便样品中的微生物分离出来，直接灌肠或者制成药丸给肠道疾病患者服用，同时收集患者治疗期肠壁粘膜样本。本发明针对健康人和肠道疾病患者肠壁粘膜差异细菌进行有益菌筛选，之后通过先的进微生物组学确定粪菌移植中起作用的优势菌，通过优化组合确定最佳细菌种类、比例和浓度。该发明与天然菌群移植方法相比，菌群种类明确、可控，无病毒及其它可能损害人体健康物质存在，本发明配方细菌可工业化批量生产，避开了天然菌群移植过程中供体选择、粪便处理等一系列繁琐手续和短板。

主权项

一种利用肠壁优势菌替代天然菌群的制备方法,其特征在于：一、健康人群肠粘膜样品获取通过与胃肠科医院合作，采用肠镜采集健康人肠壁菌群样品，‑80 ℃冻存；健康人群肠壁菌群采集的筛选条件为：a、常规血液检查正常；b、至少近3‑6个月内没有发生腹泻且没有使用过抗生素；c、无传染性疾病，如HIV、乙肝、丙肝等；d、无糖尿病及恶性肿瘤病史；e、没有胃肠道疾病；f、没有胃肠道手术史；g、没有系统自身免疫疾病及其他过敏性疾病；h、没有代谢疾病；i、没有不良性生活嗜好；j、小孩、年轻人、伴侣或者伴侣亲属优先选择；二 患者肠粘膜样品获取患者群体包括：复发性难辨梭菌感染，炎症性肠病，肠易激综合征，慢性便秘，慢性疲劳综合征，代谢疾病和自身免疫性疾病;三、粪菌移植治疗期间样品获取将经严格筛选的健康人群的粪便样品制备成粪菌悬液，直接将菌悬液或者制成的菌群药丸送入病人肠道，用以治疗各种疾病；在治疗期第7天，第14天，第28天，第56天取病人肠粘膜样品，‑80 ℃冻存；四、肠壁优势细菌分离a，活菌分离及鉴定1），取新鲜的的粪便，加入适量生理盐水，用匀浆机充分悬浮，呈泥浆状；采用过滤器或医用纱布过滤匀浆，去除排泄废弃物，保留混合菌悬液；2），取混合菌悬液涂布于MRS平板、BHI平板、LB平板、LB+5%脱脂乳平板、血平板上，置于厌氧和需氧两种条件下培养，挑选单菌落；3），所有筛选得到的细菌经生理生化和分子生物学测序确定菌体种类;b，高通量测序1），提取所有样品中微生物基因组DNA；2），将所取得的DNA送测序公司进行测序并分析。