[发明专利]一种制备人乳头瘤病毒L1蛋白类病毒样颗粒的方法

摘要

本发明涉及生物医药领域，公开了一种快速获取重组人HPV L1类病毒样颗粒(VLP)的方法，该方法是羟基磷灰石层析法(Hydroxyapatite，HAP)的优化。将表达重组HPV L1的细胞破碎后得到的粗样液经初步纯化，加入还原剂使目的蛋白组分充分解聚，以五聚体状态均一存在，然后在一定条件下进行HAP，洗脱过程中目的蛋白L1能自组装成VLP。本发明的技术方案不仅能有效提高目的蛋白纯度，还能在层析过程中即获得类病毒颗粒，省去了专门的解聚重组装过程，对提高目的蛋白收率也有很大贡献，使目的蛋白L1的分离纯化工艺变得简便、易于控制，并适于工业化生产。

主权项

1.一种制备重组人乳头瘤病毒L1蛋白类病毒样颗粒的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)取含人乳头瘤病毒L1蛋白类病毒样颗粒的料液进行初步纯化，所述的初步纯化包括菌体细胞破碎、过滤、阳离子交换层析，初步纯化过程中加入还原剂和非离子型表面活性剂，得到初步纯化液；2)调节初步纯化液电导率后，进行羟磷灰石层析，分两步进行洗脱，第一步用含盐的pH6.0‑9.0的缓冲液I洗脱，第二步用含磷酸根离子的pH6.0‑9.0的缓冲液II洗脱，缓冲液I、II均不含步骤1)所述还原剂；所述的缓冲液I为磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠缓冲液或[三‑(羟甲基)‑氨基甲烷]‑盐酸缓冲液，缓冲液I的浓度为10～100mM；所述的缓冲液II为磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠缓冲液或磷酸氢二钾‑磷酸二氢钾缓冲液，缓冲液II中磷酸根离子的浓度为400mM‑600mM；其中缓冲液I和缓冲液II中还含有非离子型表面活性剂；3)收集缓冲液II的洗脱组分，得到粒径均一的人乳头瘤病毒L1蛋白类病毒颗粒。