[发明专利]一种生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的工程菌及其构建方法与应用

摘要

本发明公开了一种生产反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸的工程菌及其构建方法与应用。本发明所提供的工程菌的构建方法，包括A1)和A2)：A1)向受体细胞中导入L‑脯氨酸‑4‑羟化酶基因、谷氨酸‑5‑激酶基因和谷氨酸‑5‑半醛脱氢酶基因；A2)为将受体细胞的α－酮戊二酸脱氢酶基因、异柠檬酸裂解酶基因或脯氨酸脱氢酶基因敲除、或用乙酰辅酶A合成酶基因替换受体细胞的丙酮酸氧化酶基因；利用重组细胞与底物进行反应得到反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸。实验证明，可以利用本发明的反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸的生产方法生产反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸。

主权项

反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸的生产方法，包括利用重组细胞与底物进行反应得到反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸；所述重组细胞的构建方法，包括对受体细胞进行A1)、A2)、A3)和A4)的改造得到重组细胞的步骤：A1)向所述受体细胞中导入L‑脯氨酸‑4‑羟化酶基因；A2)向所述受体细胞中导入谷氨酸‑5‑激酶基因；A3)向所述受体细胞中导入谷氨酸‑5‑半醛脱氢酶基因；A4)为如下B1)、B2)、B3)和B4)这四种中的任一种、任两种、任三种或四种：B1)将所述受体细胞的α－酮戊二酸脱氢酶基因敲除；B2)将所述受体细胞的异柠檬酸裂解酶基因敲除；B3)为如下B31)和B32)：B31)将所述受体细胞的丙酮酸氧化酶基因敲除；B32)向所述受体细胞中导入乙酰辅酶A合成酶基因；B4)将所述受体细胞的脯氨酸脱氢酶基因敲除；所述受体细胞为微生物细胞、非人动物细胞或植物细胞。